树鼩HMGB1、IL-4、IFN-γ、CDX2的基因克隆及初步分析

论文摘要

树鼩是一种重要的新型实验动物。其体型小、价格低、繁殖周期短以及在一些特殊的疾病模型上具有独特的优势等优点,树鼩已经成为多种人类疾病研究的重要材料。但是树鼩进化地位、基因和有关蛋白的功能差异的研究还很有限,这些制约了其研究和广泛的使用。作为在体内行使重要功能的高迁移率族蛋白B1（High mobility group box1, HMGB1）、白细胞介素-4（Interleukin-4, IL-4）、γ干扰素（Interferon-gamma, IFN-γ）]、尾型同源框转录因子2（caudal homeobox gene, CDX2）基因虽在人和其它物种有所研究,但它们的详尽功能还有待揭示,尚未见到树鼩HMGB1、IL-4、IFN-γ以及CDX2基因编码区的报道。因此,只有了解这几个基因的详细信息,才能在树鼩体内研究HMGB1、IL-4、IFN-γ以及CDX2等基因的功能,也才能利于树鼩作为疾病模型的研究和运用。本论文克隆树鼩HMGB1、IL-4、IFN-γ以及CDX2编码区的全长序列,为这四个基因相关的研究奠定基础。本论文中,采集了树鼩肝、脾、肠、子宫、胎盘等组织,提取总RNA、经逆转录、扩增、连接、转化、测序等分子生物学的方法,获得了以下的结果：（1）克隆了树鼩的HMGB1编码区,全序列共计648bp；克隆了树鼩的IL-4编码区的全序列共计426bp；克隆了树鼩的IFN-γ编码区,全序列共计501bp,并预测了这三个基因的氨基酸序列；此外,克隆到了树鼩CDX2编码区709bp的核酸序列；（2）通过序列比对分析得到树鼩的基因编码区HMGB1与灵长类的HMGB1基因编码区达99.5%以上的相似性；树鼩的IL-4基因编码区与灵长类的IL-4基因编码区相似性分为72.9%,树鼩的IFN-γ基因编码区与灵长类IFN-γ基因编码区相似性76%以上；此外,通过系统发育方法比较分析树鼩HMGB1、IL-4、IFN-γ基因与其它物种的HMGB1、IL-4、IFN-γ基因,发现树鼩亲缘关系较其它物种更接近灵长类,且距啮齿类更远；（3）获得了纯化了的重组树鼩的HMGB1蛋白。总之,我们得到了树鼩的HMGB1、IL-4、IFN-γ编码区序列,为这几种基因在树鼩体内的研究奠定了基础。同时,首次获得了重组的HMGB1蛋白,为研究HMGB1在树鼩体内以及体外功能研究提供了材料。得到了树鼩CDX2编码区内侧的大部分序列,为后续获取树鼩CDX2编码区序列提供了数据。

论文目录

• 目录
• 缩略词表
• 摘要
• Abstract
• 一、前言
• 1. 研究背景
• 2. HMGB1、IL-4、IFN-γ、CDX2的研究
• 2.1 HMGB1
• 2.2 IL-4
• 2.3 IFN-γ
• 2.4. CDX2
• 二. 材料、方法以及数据分析
• 三、结果与分析
• 1. 树鼩的HMGB1的基因的克隆、序列分析以及表达纯化
• 2. 树鼩的IL-4的基因的克隆以及序列分析
• 3. 树鼩IFN-gamma克隆以及序列分析
• 4. 树鼩CDX2的克隆以及序列分析
• 四、讨论
• 五、结论
• 参考文献
• 致谢
• 研究生期间发表文章情况及专利目录