弓形虫感染集成检测型蛋白质芯片的研制

论文摘要

蛋白质芯片也叫蛋白质微阵列，是一种建立在DNA微阵列基础上的适应功能基因组研究要求的蛋白质分析技术。它具有用样少、检测方便快速、高效性、并行性、高通量等优点。这些优点赋予了蛋白质芯片广阔的应用前景，因而越来越引起人们的关注。其中，以临床医学检测为目的的蛋白质芯片研究是其基础应用领域一个重要组成部分。本文选择了弓形虫检测作为研究的内容，设计并成功的构建了弓形虫感染集成诊断型蛋白质芯片。并应用该型芯片检测了标准对照血清和临床血清样品中的两种弓形虫特异性抗体IgG和IgM。取得了较为满意的结果。具体而言，论文的主要内容包括：1．在制备弓形虫检测型蛋白质芯片的过程中，对羊抗人两类抗体进行了荧光标记，选择了琼脂糖对制备蛋白质芯片的载体-玻片进行了修饰，确立了在琼脂糖凝胶膜玻片上固定抗原分子（抗体捕获分子）的工作浓度、固定时间、抗原-抗体特异性温育反应的最佳工作时间等。2．通过荧光染料Cy3标记二抗与固定的抗体的特异性结合反应原理，检测了人两种抗体IgM，IG在琼脂糖膜玻片上固定的效果，绘制了两类抗体浓度-荧光强度标准曲线，确定了两种抗体作为阳性对照在芯片上的最适工作条件。3．设计了基于琼脂糖膜玻片的弓形虫感染集成检测型蛋白质芯片，运用其分别对标准阳性血清、标准阴性血清和临床血清样品中两种抗体进行检测。并与ELISA法比较了对抗体IgM检测的结果。与传统方法相比较，本实验建立的方法具有高通量、耗材少、检测时间短、灵敏度高等优点。

论文目录

• 目录
• 中文摘要
• 英文摘要
• 一 文献综述
• 1 蛋白质芯片概述
• 1.1 蛋白质芯片的概念和原理
• 1.2 蛋白质芯片在微生物学领域的应用
• 1.2.1 用于微生物的检测
• 1.2.2 用于微生物蛋白质组学的研究
• 1.3 蛋白质芯片技术的优点
• 2 蛋白质芯片的制作过程
• 2.1 载体的选择
• 2.2 载体表面的修饰及活化
• 2.3 蛋白质捕获分子（探针）的选择
• 2.4 蛋白质捕获分子（探针）在芯片表面的固定
• 2.4.1 物理吸附
• 2.4.2 化学偶联
• 2.5 蛋白质芯片的封闭
• 2.6 蛋白质芯片的检测分析
• 3 刚地弓形虫（Toxoplasma gondii,Toxo.gondii）
• 3.1 Toxo.gondii及其危害
• 3.2 Toxo.gondii的生活史
• 3.3 Toxo.gondii的致病机制
• 3.4 Toxo.gondii的检测方法
• 3.4.1 病原学检查
• 3.4.2 基因检测
• 3.4.3 免疫学检测
• 3.4.3.1 血清循环抗原检查
• 3.4.3.2 检测抗体的常用方法
• 3.4.3.3 蛋白质芯片检测方法
• 4 论文课题的选择
• 二 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 Cy3标记羊抗人IgM,IgG的制备
• 2.2 实验条件的确立
• 2.2.1 Toxo.gondii P30抗原最佳工作浓度的确立
• 2.2.2 Toxo.gondii P30抗原最佳固定时间、抗原-抗体最佳温育时间的确立
• 2.2.3 Toxo.gondii P30特异性抗体IgG,IgM（阳性对照）最佳工作浓度的确定
• 2.3 Toxo.gondii感染诊断型蛋白质芯片的建立
• 三 结果与分析
• 1 两种羊抗人抗体IgM、IgG的标记效率
• 2 实验条件的确立
• 2.1 Toxo.gondii P30抗原最佳工作浓度的确立
• 2.2 Toxo.gondii P30抗原最佳固定时间的确立
• 2.3 最佳温育时间的确定
• 2.4 Toxo.gondii抗体（阳性对照）工作条件的确定
• 3 Toxo.gondii感染集成诊断型蛋白质芯片的建立
• 3.1 检测结果分析
• 3.2 蛋白质芯片可行性论证
• 四 讨论
• 1 Toxo.gondii感染的血清学检测研究
• 2 实验成果及意义
• 4 展望
• 五 致谢
• 参考文献
• 作者简介