论文摘要
目的观察Visudyne光动力疗法（PDT）对离体培养的兔晶状体上皮细胞（RLECs）和人晶状体上皮细胞系（HLECs）的杀伤作用,确定杀伤LECs的最佳PDT参数,探讨PDT在体外杀伤LECs的作用机理,评价PDT在兔眼术中应用抑制后囊膜混浊（PCO）的有效性和安全性。方法（一）RLECs原代培养和传代培养,HLECs系传代培养,透射电镜观察细胞超微结构。MTT法测定单纯激光、不同浓度光敏剂和PDT对RLECs和HLECs的杀伤作用,并筛选最佳PDT参数。（二）流式细胞仪P1染色法分析PDT对HLECs细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞形态变化。（三）兔眼晶状体超声乳化摘除后囊袋内注入含有Visudyne的透明质酸钠,并行激光照射。术后6周和12周对PCO评估通过临床观察（分别对纤维化型PCO和再生型PCO进行分级）、照相、光镜组织学检查,同时测量中央后囊膜厚度,电镜观察角膜和虹膜超微结构变化。结果（一）在体外成功培养兔RLECs。MTT检测结果显示：单纯激光对RLECs和HLECs无杀伤作用。单纯光敏剂组：Visudyne浓度<0.125μg/ml,对细胞没有杀伤作用,>0.125μg/ml,杀伤率呈浓度依赖性。PDT组细胞杀伤率呈一定的浓度依赖性。（二） Visudyne光动力疗法作用于HLECs后,细胞周期分析显示G2期细胞数增多,而S期细胞数减少.。PDT后12h、24h和48h细胞凋亡率分别为77.17±2.55%、93.13±1.14%和97.47±0.90%。扫描电镜观察见：激光光斑未照射部位为正常HLECs,激光光斑照射部位细胞呈凋亡表现。（三）术后6周和12周,PDT治疗组和对照组比较：PCO程度明显轻,术后6周：纤维化型PCO和再生型PCO分级两组之间有统计学显著性差异（P<0.001）,术后12周：两组之间比较：纤维化型PCO分级有统计学显著性差异（P=0.0306）,再生型PCO分级无统计学显著性差异（p=0.1888）。Soemmering环形成情况PDT治疗组明显较对照组轻。PDT治疗组和对照组后囊膜厚度无差异（P=0.3619）。电镜观察显示正常角膜和虹膜超微结构。结论（一）Visudyne光动力疗法对LECs可以产生相当强的杀伤作用。杀伤晶状体上皮细胞的最佳参数为：当激光光斑直径5mm时,Visudyne 0.125ug/ml,激光波长689nm,光照剂量30J/cm2,光照强度500mW/cm2,光照持续时间60s,此时对RLECs和HLECs的杀伤率可达86.20%和88.80%。（二） Visudyne光动力疗法对HLECs的杀伤机理为抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,细胞凋亡是PDT杀伤LECs过程中的一个早期重要事件。（三）Visudyne光动力疗法在兔眼术中应用能有效抑制PCO,并有足够的安全性。
论文目录
相关论文文献
标签：后囊膜混浊论文; 晶状体上皮细胞论文; 光动力疗法论文; 体外实验论文; 细胞周期论文; 凋亡论文; 体内实验论文;