论文摘要
目的观察不同剂量X射线在体外对肺腺癌细胞A549粘附分子E-cadherin/β-catenin和Wnt/β-catenin信号通路的影响,进一步探讨X射线抑制肿瘤细胞浸润、转移,治疗肺癌的作用机制。方法1.常规传代培养肺腺癌细胞A549,分为0Gy、2Gy、5Gy、10Gy剂量组,分别进行X射线照射。照射后继续培养24h,进行相关实验检测。2. Transwell小室检测细胞的侵袭力。免疫细胞化学检测β-catenin的表达、Western Blot和RT-PCR分别从蛋白和转导水平检测细胞中粘附分子E-cadherin和β-catenin的表达。3. MTT法检测射线对细胞的增殖抑制作用;AO/EB荧光双染法和TUNEL法观察细胞凋亡形态并测定凋亡率,流式细胞仪（FCM）测定细胞周期。Western Blot和RT-PCR分别从核蛋白和转导水平检测细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和CyclinD1的表达。结果1. Transwell小室侵袭实验显示:A549细胞具有一定的体外侵袭力,射线照射后其侵袭力有不同程度的减弱,照射剂量越大,侵袭力减弱越明显,与对照组相比,差异有显著性（P<0.05）。2.免疫细胞化学、Western Blot和RT-PCR结果显示:照射前β-catenin在细胞膜上有极微弱的表达,而在胞浆中有较强表达,照射后β-catenin胞膜部分表达有所增强,胞浆表达明显减弱（P<0.05）。照射后E-cadherin在总蛋白和mRNA水平均显著高于对照组（P<0.05）,并随着照射剂量的增加表达逐渐增加;照射前后β-catenin在总蛋白和mRNA水平表达无显著性差异（P>0.05）。3. MTT比色法显示:X射线对A549细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性增加。AO/EB荧光双染法和TUNEL法结果显示:正常对照组在24h大多数细胞核染色质呈绿色,仅少量核呈亮绿色或橘红色,呈固缩状的凋亡细胞;射线照射后24h,照射组可见较多的核着亮绿色或橘红色、呈固缩状的凋亡细胞,随着照射剂量的增加,细胞凋亡率增加,与对照组相比,差异有显著性（P<0.05）。4.流式细胞仪（FCM）测定细胞周期显示:2Gy射线照射后,细胞周期各期并未发生显著变化（P>0.05）。从5Gy开始,出现G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期无显著变化。随着照射剂量增加,G0/G1期阻滞越明显,与对照组相比,差别有显著性（P<0.05）。5. Western Blot和RT-PCR结果显示:照射后β-catenin的核表达呈剂量依赖性降低（P<0.05）;2Gy照射时,CyclinD1 mRNA和核蛋白未见明显变化（P>0.05）,从5Gy开始CyclinD1的表达逐渐下降（P<0.05）。结论1. X射线通过上调A549细胞上粘附分子E-cadherin和β-catenin在细胞中的表达,增加细胞间的粘附力,降低肿瘤细胞的侵袭力,这可能是其抑制肺腺癌细胞的浸润与转移的途径之一。2. X射线通过降低A549细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和CyclinD1的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导细胞发生凋亡,进而杀伤肿瘤细胞。3. X射线通过调节β-catenin在细胞的分布,使细胞膜上与E-cadherin结合的部分增加,而胞核部分减少;进而通过增强细胞间的粘附力、促进凋亡而发挥抗癌作用。
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