论文摘要
目的:探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布（Celecoxib）联合奥沙利铂（Oxaliplatin）对人结肠癌HCT-116细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制,为结肠癌的药物治疗提供依据。方法:（1）将Celecoxib和Oxaliplatin单独及联合作用于结肠癌细胞系HCT-116细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测吸光度值,计算对照组和各实验组细胞的生长抑制率。（2）应用流式细胞仪（FCM）研究Celecoxib对结肠癌HCT-116细胞周期的作用;Celecoxib和Oxaliplatin及联合药物组对结肠癌HCT-116细胞凋亡作用,计算细胞凋亡率;倒置及共聚焦显微镜观察细胞形态学变化。（3）RT-PCR法检测单药组及联合药物组作用于结肠癌HCT-116细胞后survivin、VEGFmRNA表达水平的变化（4）Western Blot法检测survivin及VEGF在蛋白水平的表达。结果:（1）MTT法显示Celecoxib组,Oxaliplatin组及联合用药组均可抑制HCT-116细胞的生长,呈时间和剂量依赖性,实验组与对照组及各实验组之间差别均有统计学意义（P<0.05）,联合药物组抑制呈协同作用（Q>1.15）。（2）流式细胞术检测后发现①HCT-116细胞经Celecoxib作用48小时后可见细胞周期S期明显抑制,且随着浓度的增加HCT-116细胞周期G0/G1期比例增加,S期细胞比例下降,具有统计学意义（P<0.05）。②Celecoxib组,Oxaliplatin组及联合药物组作用48小时后,均能有效诱导HCT-116细胞凋亡,且在上述各浓度联合应用时具有协同效应。（3）RT-PCR检测表明:Celecoxib组和联合药物组作用48h后survivin、VEGF mRNA表达明显低于对照组（P<0.05）。（4）Western Blot法结果显示Celecoxib组和联合药物组作用于结肠癌HCT-116细胞48h后,细胞中的VEGF、Survivin蛋白表达下降（P<0.05）。结论:（1）Celecoxib能抑制体外培养的人结肠癌HCT-116细胞生长,并呈时间和剂量依赖性;Celecoxib能使细胞发生凋亡并使细胞周期阻滞于G0/G1期。（2）Celecoxib对HCT-116细胞生长抑制和诱导凋亡作用可能与survivin和VEGF表达下调有关。（3）Celecoxib与Oxaliplatin联合应用后,具有协同抑瘤作用。
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