食物中毒菌五联融合毒素基因的表达及免疫特性研究

食物中毒菌五联融合毒素基因的表达及免疫特性研究

论文摘要

以常见食物中毒菌O157∶H7 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和肉毒梭菌所产毒素为研究对象,克隆了三种细菌的五个毒素基因片段;将五个毒素基因片段采用一定的linker 序列(G-P-G-P-G)进行串联(Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB),通过PCR 逐步扩增出了融合毒素RHDS-5 基因全长序列2937bp,并定向克隆到表达载体pET-22b(+)的NcoI 和XhoI 位点之间,构建了重组质粒RHDS-5-22b,且在表达宿主菌E.coli BL21 中得到有效表达(9.90%),融合蛋白分子量112.369kDa;37℃诱导表达蛋白以可溶性(5.295%)和包涵体(4.694%)两种形式存在;25℃过夜诱导全部是可溶性表达;将两种形式的表达蛋白经过初步纯化,分别免疫吉戎獭兔制备血清抗体, ELISA 和琼脂扩散试验表明,融合毒素免疫吉戎獭兔后产生抗五种毒素的抗体,且具有良好的特异性,对毒素的检测具有较高的敏感性。证明融合毒素保留了五种天然毒素的抗原性,同样条件下进行多基因串联至少可达3000bp 能在原核载体表达,至少包含4 个linker 而不影响串联基因的抗原特性,表达产物可诱导机体产生抗多种毒素抗体。为融合毒素的进一步应用及建立食物中毒菌毒素广谱、快速的检测方法奠定了基础。

论文目录

  • 引言
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 大肠杆菌Vero 毒素及其免疫学研究进展
  • 第二章 金黄色葡萄球菌肠毒素及其应用研究进展
  • 第三章 肉毒梭菌神经毒素及其应用研究进展
  • 第二篇 研究内容
  • 第一章 融合毒素 RHDS-5 基因片段的克隆及序列分析
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第二章 融合毒素 RHDS-5 基因片段的串联与表达
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第三章 融合毒素 RHDS-5 表达产物的纯化及抗体免疫特性分析
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 导师及作者简介
  • 相关论文文献

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