klotho基因在糖尿病肾病患者体内表达状况的研究

论文摘要

目的：对糖尿病肾病患者血液中klotho蛋白及胰岛素样生长因子（工GF-1）信号通路相关因子水平进行分析研究,探讨其在糖尿病肾病发生机制中的作用及相关的影响因素。方法：1.研究对象及分组：选取山东滨州医学院附属医院2010年9月至2011年6月门诊及入院的2型糖尿病患者及于本院体检中心进行体检的正常健康人群共149例作为研究对象,按照相应诊断标准将其分为三组,其中正常对照组（NC组）42例、糖尿病无肾病组（DM组）61例、糖尿病肾病组（DN组）46例。2.空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）.糖化血红蛋白（HbAlc）检测：清晨空腹抽取外周静脉血,检测FPG.FINS,根据公式（FPG*FINS）/22.5计算胰岛素抵抗指数（IRI）,采用高压液相色谱分析法检测HbAlc含量。3.生化指标检测：清晨空腹抽取外周静脉血,检测血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）；采血前一天开始留取24小时尿,测定尿微量白蛋白排泄率（UAER）.4.外周血白细胞原位杂交：取肝素抗凝血约1mL,检测外周血白细胞iNOSmRNA和eNOSmRNA表达,比较各组之间差异。5.酶联免疫吸附试验（ELISA）:清晨空腹抽取外周静脉血,离心取血清,检测各组血清中k10tho蛋白、IGF-1含量。6.反转录聚合酶链反应（RT-PCR）:取肝素抗凝血1mL,检测各组外周血全血中klothomRNA.IGF-1RmRNA表达水平。结果：1.一般状况：各组年龄之间比较无统计学意义（P>0.05）。DN组病程明显高于DM组病人（P<0.05）。收缩压DN组明显高于NC组（P<0.01）；舒张压DN组与DM组均明显高于NC组（P<0.05）。2.FPG.FINS.HbAlc和UAER检测结果：DM组和DN组FPG.FINS.IRI和HbAlc含量与NC组相比均明显升高（P<0.01）,DM组和DN组两组之间FPG、FINS、IRI含量比较差异无统计学意义（P>0.05）,但HbAlc含量DN组与DM组相比显著升高（P<0.01）。3.生化指标检测结果：各组血清中TC比较差异无统计学意义（P>0.05）。DM组和DN组血清中TG水平与NC组相比均明显增高（P<0.01）。血清中BUN、Cr水平DN组与NC组、DM组相比均明显升高（P<0.01）。UARE水平DM组和DN组均明显高于NC组（P<0.01）,DM组和DN组两组间比较DN组增高更明显（P<0.01）。4.外周血白细胞原位杂交iNOSmRNA、eNOSmRNA表达水平检测结果：iNOSmRNA、eNOSmRNA表达水平DM和DN两组与NC组比较均明显增高（P<0.01）,但DN组与DM组比较iNOSmRNA、eNOSmRNA表达水平均有显著降低（P<0.01）。5.血清中klotho蛋白、IGF-1含量检测结果：DM组和DN组血清中klotho蛋白含量均明显低于NC组（P<0.01）,DN组klotho蛋白含量与DM组相比明显降低（P<0.05）。DM组血清中IGF-1含量明显高于NC组（P<0.05）,DN组与NC组相比显著升高（P<0.01）,DM组和DN组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。6.外周血klothomRNA、IGF-1RmRNA表达水平检测结果：DM组和DN组klothomRNA和IGF-1RmRNA表达水平与NC组相比均显著降低（P<0.01）,DN组与DM组比较降低更明显（P<O.05）。7.各指标间相关性分析结果：DN组患者UAER与年龄、病程、FPG、IRI, TG、IGF-1成正相关（P<0.05）,与iNOSmRNA、eNOSmRNA、血清中klotho蛋白含量成负相关（P<0.05）；外周血白细胞iNOSmRNA表达与eNOSmRNA、血清中klotho蛋白含量成明显正相关（P<0.01）,与年龄、病程、收缩压、UAER、IGF-1成负相关（P<0.05）；外周血白细胞eNOSmRNA表达与iNOSmRNA、血清中klotho蛋白含量成明显正相关（P<0.01）,与年龄、病程、收缩压、舒张压、HbAlc、Cr、UAER、IGF-1成负相关（P<0.05）；血清中klotho蛋白含量与iNOSmRNA、eNOSmRNA成明显正相关（P<0.01）,与年龄、病程、收缩压、HbAlc、TG, Cr、UAER、IGF-1均成负相关（P<0.05）；血清中IGF-1含量与年龄、病程、收缩压、FPG、IRI HbAlc、TC、TG、Cr、UAER成正相关（P<0.05）,与iNOSmRNA、eNOSmRNA、血清中klotho蛋白含量成明显负相关（P<0.01）。结论：1. DM、DN组外周血白细胞klothomRNA表达及血清klotho蛋白含量均明显降低,并以DN组降低更著。提示糖尿病的发病与klotho信号的作用减弱明显相关,且病情愈重klotho信号减弱程度愈明显。2. DM、DN组血清IGF-1含量明显升高;IGF-1RmRNA表达水平降低,且以DN组降低更显著。提示IGF-1配体信号增强参与了DM及DN的发病；同时在DM及DN发病过程中,IGF-1配体信号增强引起了IGF-1受体信号（IGF-1RmRNA）的下调,且下调程度与病情加重程度明显相关。IGF-1信号系统在DM及DN发病中的确切作用机制尚待探讨。3.NC组外周血白细胞中无iNOSmRNA表达,DM组和DN组iNOSmRNA、eNOSmRNA均有明显表达,但DN组较DM组的表达有所降低。显示两型一氧化氮合酶的转录水平随DM的发生而升高,但进展到DN阶段时两者又明显降低,该实验结果的机制尚待阐明。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附录
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况表