论文摘要
背景与目的：幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病原菌，并与胃癌和胃粘膜相关性淋巴瘤的发生密切相关。根据Hp是否含有细胞毒素相关蛋白编码基因（cytotoxin-associated protein gene A，CagA）和空泡毒素相关蛋白编码基因（Vacuolating cytotoxin-associated protein gene A，VagA）将Hp分为Ⅰ型菌株（CagA+、VagA+）和Ⅱ型菌株（CagA-、VagA-）两种。Ⅰ型菌株含有一个约40kb的特殊基因片段，因其编码CagA等毒力因子而被称为cag毒力岛。1997年到1998年，2个Hp Ⅰ型菌株26695菌株和J99菌株的基因组被完全测序，使人们能够全面了解Hp Ⅰ型菌株的基因组结构和主要特征。鉴于Ⅰ型菌株现被认为是消化道溃疡和胃肿瘤的重要成因，因此CagA基因的研究成为Hp研究中的热点。目前，对于治疗Hp感染主要应用抗生素和质子泵抑制剂，但抗生素的广泛应用会导致Hp耐药性的不断增加，且价格昂贵，复发的机率较大。因此，预防Hp的感染十分必要和紧迫。但目前尚未研制出实用有效的Hp Ⅰ型菌株疫苗。为此，本研究拟利用分子生物学技术，建立CagA的原核表达系统，为Hp重组疫苗的研制提供备选抗原，同时也为Hp Ⅰ型菌株的鉴定试剂盒提供抗原参考。 方法：根据GenBank收录的Hp CagA序列，设计PCR引物，并在每条引物前分别添加内切酶位点。通过PCR扩增Hp菌株的CagA基因，运用分子克隆的经典方法，用pGEM-T Easy载体携带该基因转化工程菌JM109，继而通过蓝白实验筛选出阳性菌落并对该基因进行测序，将其结果与已公布的CagA基因序列比对。测序结果正确后再将CagA基因从pGEM-T Easy-CagA质粒中切出，用表达载体pGEX-5X-1携带该基因转化宿主菌BL21（DE3），通过氨苄青霉素抗性筛选和菌落PCR挑选出阳性克隆pGEX-5X-1-CagA。而后以IPTG诱导含pGEX-5X-1-CagA的宿
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