“饥饿”和/或地塞米松以及发光二极管照射对分化后C2C12蛋白含量影响的实验研究

论文摘要

目的:大强度的离心运动之后常发生的延迟性肌肉酸痛（DOMS）。DOMS的机理与防治一直是运动科学的研究热点。在DOMS经历的Z带撕裂、损伤蛋白质降解和蛋白质合成三个主要阶段中,损伤蛋白质的泛素-蛋白酶体特异性蛋白质降解途径（UPP）降解是主要的限速过程,而对损伤蛋白质UPP降解贡献最大的是糖皮质激素（GC）通路的激活。我们的实验采用地塞米松（DEX）刺激分化后的C2C12细胞,复制GC引起蛋白质降解的离体细胞模型,在此基础上采用发光二极管（LED）照射观察其对GC引起蛋白质降解作用的影响。 方法:实验1:分化4天后的C2C12细胞分为正常组、Unfed组、DEX组和Unfed加DEX组,正常组每天换液,Unfed组不换液,DEX组每天更换的培养基中含100nM的DEX,Unfed加DEX组自第4天加入含100nM DEX的培养基后不予换液。从分化后第5天起每天测定细胞的蛋白含量,测定方法采用CBA法。实验2:分化4天后的C2C12细胞分为正常组、DEX组和DEX+LED照射组,其中DEX+LED照射组从分化开始后第4天起,每天换液后12h给予LED照射15min,共2天。LED供电电流60mA,波长650±17nm,剂量分别为207 mJ/cm2、435.6 mJ/cm2、662.4mJ/cm2和1194.3 mJ/cm2。分化后第6天测定蛋白含量。 结果:实验1:Unfed组与DEX组以及Unfed加DEX组都能使分化4天后的C2C12细胞的蛋白含量极为显著低于正常组（P<0.01）,同时DEX组和Unfed+DEX组分细胞蛋白含量又极为显著低于Unfed组（P<0.01）,而DEX组与Unfed+DEX组之间无显著差异（P>0.05）。实验2:在采用单纯DEX刺激方式复制的肌肉萎缩模型基础上,2天照射后,各照射组蛋白量占DEX组蛋白量的百分比分别为:92.1%、99.0%、107.4%和95.9%。经2天662.4 mJ/cm2的LED照射使分化后C2C12蛋白含量显著高于DEX组（模型组）（P<0.05）,经2天207 mJ/cm2 LED照射后,分化后C2C12的蛋白含量下降了7.9%,但是没有统计学上的显著性。435.6 mJ/cm2和1194.3 mJ/cm2的LED照射分化后C2C12蛋白含量与DEX组相比没有显著差异（P>0.05）。 结论:用100nM的DEX作用于分化后的C2C12细胞可明显促进蛋白质降解,

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 GC与饥饿对C2C12成肌细胞或肌管蛋白质降解与合成的影响
• 1.1.1 GC的生理与药理作用
• 1.1.2 GC对C2C12细胞增值与分化的影响
• 1.1.3 GC对C2C12细胞和肌管蛋白合成与降解及蛋白含量的影响
• 1.1.4 “饥饿”对C2C12细胞的作用
• 1.1.5 “饥饿”与GC共同作用对肌管蛋白质降解与合成的影响
• 1.1.6 GC对C2C12成肌细胞或肌管的其它作用
• 1.2 GC通过激活泛素蛋白酶体通路促进蛋白质降解
• 1.2.1 泛素系统
• 1.2.2 GC通过激活泛素系统促进蛋白质降解
• 1.2.3 GC与胰岛素在通过泛素系统调节蛋白质降解中的关系
• 1.3 离心运动可引起泛素蛋白酶体通路依赖的蛋白质降解
• 1.4 C2CC12成肌细胞的生物学特性及培养条件
• 1.5 LED应用进展
• 1.6 光生物调节作用的生物信息模型
• 2 选题依据
• 3 材料和方法
• 3.1 主要材料和试剂
• 3.2 培养液与试剂
• 3.3 细胞培养、传代与分化
• 3.4 实验分组
• 3.5 LED照射
• 3.6 蛋白含量的测定
• 3.7 统计分析
• 4 结果
• 4.1 分化后第5天“饥饿”与DEX对C2C12蛋白含量的影响
• 4.2 分化后第6天“饥饿”与DEX对C2C12蛋白含量的影响
• 4.3 分化后第7天“饥饿”与DEX对C2C12蛋白含量的影响
• 4.4 分化后第8天“饥饿”与DEX对C2C12蛋白含量的影响
• 4.5 “饥饿”与DEX对C2C12蛋白含量影响的时间变化曲线
• 4.6 “饥饿”与DEX对C2C12形态学变化的影响
• 4.7 DEX与LED共同作用对C2C12蛋白含量的影响
• 5 讨论
• 5.1 “饥饿”对C2C12蛋白含量的影响
• 5.2 DEX对C2C12蛋白含量的影响
• 5.3 “饥饿”与DEX共同作用对C2C12蛋白含量的影响
• 5.4 Unfed与DEX对分化后C2C12蛋白含量影响的时间变化趋势
• 5.5 DEX与LED共同作用对C2C12蛋白含量的影响
• 6 小结
• 7 参考文献
• 8 主要仪器
• 9 缩写
• 10 附录：发表论文
• 11 后记
• 华南师范大学学位论文原创性声明