注射用胶原酶治疗腰椎间盘突出症体外作用机制的研究

论文题目: 注射用胶原酶治疗腰椎间盘突出症体外作用机制的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 微生物与生化药学

作者: 张红梅

导师: 张景海

关键词: 注射用胶原酶,磷脂酶,抑制作用,胶原蛋白,水解

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 腰椎间盘是指椎骨的衔接处，使椎骨富有弹性并平均分配重力的部位，随着年龄的增长，腰椎间盘的外形及体积发生显著的变化，同时伴随着组成成分及特性的变化。本病是因为腰椎间盘各部分，尤其是髓核，有不同程度的退行性改变后，在外界因素的作用下，椎间盘的纤维环破裂，髓核组织从破裂之处突出于后方或椎管内，导致相邻的组织，如脊神经根脊髓等遭受刺激或压迫，从而产生腰部疼痛，一侧下肢或双下肢麻木、疼痛等一系列临床症状。其确切病因尚欠清楚，近来研究表明腰椎间盘突出症的原因可能有以下三点：一是，突出的椎间盘中胶原蛋白的质和量的变化影响椎间盘结构强度和功能稳定；二是，突出椎间盘髓核中胶原酶活性高于正常椎间盘髓核中胶原酶的活性；三是，在突出的椎间盘中，致炎物质磷脂酶A2（Phospholipase A2；PLA2）含量异常增高，具有强致炎性，并导致椎间盘突出症疼痛。注射用胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶（Collagenase），简称胶原酶，临床用于治疗腰椎间盘突出症。由于它在人体生理pH及正常体温下，可对椎间盘组织成分胶原蛋白进行特异性溶解，使其被吸收，从而促进突出的椎间盘退化，使椎间盘突出物缩小或消失，进而解除其对神经根的压迫，而不损伤其他蛋白质和组织，达到治疗或治愈的目的。目前国内临床所使用的注射用胶原酶是由溶组织梭状芽孢杆菌（Clostridium histolyticum）发酵，经提取，精制而成。本文探讨注射用胶原酶对磷脂酶A2的抑制作用及其对三种类型胶原蛋白水解活性比较。实验结果表明： 1、注射用胶原酶体外对胶原蛋白水解活性： SDS—PAGE法测胶原酶对胶原蛋白水解效率结果不直观，且Ⅰ型胶原蛋白溶解性差，上清蛋白电泳显不出色，很难用电泳方法检测，SDS—PAGE法初步表明胶原酶对Ⅲ型胶原蛋白水解活性要强于Ⅱ型。部颁标准方法绘制三种胶原蛋白水解的趋势图，进行胶原酶对三种胶原蛋白水解作用的比较表明：对三种胶原蛋白的水解速度是Ⅲ型＞Ⅱ型＞Ⅰ型。 2、注射用胶原酶与磷脂酶A2活性的关系：胶原酶制剂的加入，PLA2活性明显降低，且随着胶原酶溶液加入量的增大，PLA2活性逐渐降低。

论文目录:

中文摘要

Abstract

前言

一、腰椎间盘突出症发病机制及临床表现

二、腰椎间盘突出症非手术治疗方法

三、注射用胶原酶治疗腰椎间盘突出症

1、胶原酶治疗椎间盘突出的基础研究

2、胶原酶治疗机理

3、注射用胶原酶制剂

四、磷脂酶A_2与腰椎间盘突出症

1、PLA_2的分子生物学

2、退变椎间盘中PLA_2活性升高

3、PLA_2在椎间盘疾病中的作用机理

4、PLA_2拮抗剂治疗椎间盘突出症

五、立题依据及目的

1、突出的椎间盘中胶原蛋白的质和量的变化

2、突出的椎间盘中PLA_2活性异常增高

第一部分、胶原酶对三种类型胶原蛋白水解活性比较

一、实验材料

二、实验方法

1、蛋白含量测定方法

1．1 Lowry法测蛋白含量

1．2 考马斯亮兰法

2、部颁标准测胶原酶效价

2．1 胶原蛋白水解效率测定方法

2．2 部颁标准方法测胶原酶效价

3、不连续-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

三、实验结果

1、胶原酶制剂蛋白含量测定

2、底物胶原蛋白溶液的配制

3、SDS—PAGE法测胶原酶对胶原蛋白水解效率

4、部颁标准方法测胶原酶对三种类型胶原蛋白水解效率

四、小结

五、讨论

第二部分注射用胶原酶与磷脂酶A_2活性的关系

一、实验材料

二、实验方法

1、胶原酶对磷脂酶A_2活性影响的测定

2、胶原酶对PLA_2有无水解效应的测定

3、注射用胶原酶对磷脂酶A2活性的抑制作用类型的测定

4、不同浓度胶原酶对磷脂酶A2的活性影响

三、实验结果

1、胶原酶制剂对磷脂酶A_2活性的影响

2、不同浓度的注射用胶原酶对PLA_2的水解作用

3、注射用胶原酶对PLA_2活性抑制类型的确认

四、小结

五、讨论

六、全文结论

参考文献

致谢

发布时间: 2006-11-27

注射用胶原酶治疗腰椎间盘突出症体外作用机制的研究

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