中药指纹图谱及组分高效分离纯化方法研究

论文摘要

本文运用高效液相-质谱联用发展了中药指纹图谱的建立方法。基于色谱保留机理,在高效液相分析基础上优化液相分离条件,并把它放大到高效液相制备中,进行中药组分的纯化分离。以中药川芎为对象进行中药指纹图谱建立方法研究。选择来自川芎地道产地四川的五个不同区域、五种不同形态的15个川芎样品作为研究对象。经过样品的筛选、色谱条件的优化和色谱柱的筛选,首先建立了指纹谱反相液相色谱分析方法。运用此方法,完成了15个样品的分离分析。通过反相色谱指纹谱的相似性研究比较了不同样品的特征。传统中药在使用时多以水煎进行服药,而水煎方式包含了大量的强极性化合物。为了指纹谱的完整性,以及更充分的研究该药材,本论文对这些强极性化合物进行了亲水分离研究。通过对强极性样品预处理,尽可能除去反相指纹谱中已涵盖的化合物,建立了合适的亲水色谱条件。依此建立了川芎的强极性指纹谱与反相色谱指纹谱形成互补,从而建立了川芎完整的色谱指纹谱分析方法。以工业级姜辣素样品为研究对象,进行了组分的分离纯化研究。用硅胶柱进行姜辣素类化合物的富集,然后在高效液相制备上进行二维制备。进行高效液相制备时,先在分析色谱柱上进行分析,然后放大到制备的高效液相色谱柱上,这样节省了样品和溶剂。在自动纯化制备过程中,馏分检测方式采用质谱和液相相结合,使得馏分收集更加准确,选择性更高,目标性更强。采用了优化软件,进行分析液相条件的选择,并放大到制备过程。以三到五次液相梯度分析实验,计算出共有峰的保留参数,再用软件进行优化。这样避免了探索梯度条件时反复的尝试,以节省时间、溶剂和样品。特别是在进行组分制备时,可以将分析条件下的保留参数,应用到制备柱上,用保留参数的方法优化梯度的优势更加明显。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 文献综述
• 1.1 中药指纹谱
• 1.2 高效液相指纹谱技术
• 1.2.1 反相色谱（RPLC）
• 1.2.2 亲水色谱（HILIC）
• 1.2.3 正相色谱（NPLC）
• 1.2.4 高效液相色谱质谱联用技术在中药体系中的应用
• 1.3 川芎指纹谱的研究进展
• 1.4 中药分离制备中的现代分离技术
• 1.4.1 大孔树脂的应用
• 1.4.2 制备液相色谱（Preparative HPLC）
• 1.4.3 制备高速逆流色谱（High-Speed Counter-Current Chromatography,HSCCC）
• 1.5 姜辣素化合物分离技术的研究进展
• 1.6 液相色谱保留方程和色谱峰形参数
• 1.6.1 反相色谱的保留方程
• 1.6.2 亲水色谱的保留方程
• 1.6.3 色谱峰形参数的规律
• 1.7 中药指纹图的数据分析的方法
• 2 中药川芎反相指纹谱的建立
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 仪器与试剂
• 2.1.2 样品的制备
• 2.1.3 样品的筛选
• 2.1.4 色谱柱死时间和系统延迟的测定
• 2.1.5 梯度的优化
• 2.1.6 色谱柱的筛选
• 2.1.7 指纹图谱的建立及精密性、稳定性、重复性的考察
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 样品的筛选
• 2.2.2 分析梯度条件的优化
• 2.2.3 色谱柱的筛选
• 2.2.4 指纹谱的建立及相似度的计算
• 2.2.5 精密性、稳定性、重复性的考察
• 2.3 本章小结
• 3 强极性化合物的亲水色谱分离
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 实验材料、试剂及仪器
• 3.1.2 样品的制备
• 3.1.3 色谱柱死时间和系统延迟的测定
• 3.1.4 梯度的优化
• 3.1.5 色谱柱的筛选
• 3.1.6 指纹图谱的建立和精密性、稳定性、重复性的考察
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 样品预处理
• 3.2.2 梯度条件的优化
• 3.2.3 色谱柱的选择
• 3.2.4 指纹图谱的建立
• 3.2.5 重复性、稳定性、精密性考察
• 3.2.6 川芎反相和亲水指纹图谱间的关系
• 3.3 本章小结
• 4 姜辣素类化合物的高效纯化制备
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 主要仪器和试剂
• 4.1.2 高效纯化分离流程
• 4.1.3 提取物萃取与组分分离
• 4.1.4 高效液相制备方法的优化
• 4.1.5 姜辣素类化合物的二维制备
• 4.1.6 制备样品的后处理
• 4.1.7 化合物的纯度分析
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 姜辣素的富集与6-姜醇的快速制备
• 4.2.2 制备液相条件预测与优化
• 4.2.3 SF2的二维制备
• 4.2.4 结构鉴定
• 4.3 结论
• 结论
• 参考文献
• 附录1 川芎分析谱图
• 附录2 姜辣素类化合物核磁数据
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢