本文主要研究内容
作者王芳芳（2019）在《基于氨基酸代谢的原位生物正交标记动态示踪肠道病毒EV71侵染的研究》一文中研究指出：肠道病毒EV71(Enterovirus 71,EV71)作为引发手足口病(Hand Foot Mouth Disease,HFMD)的主要病原体,可导致脑炎、脑膜炎、急性弛缓性麻痹、心肺功能衰竭甚至死亡。然而,目前对肠道病毒EV71感染机制仍不够清晰,国家和社会对相关疾病的防控依然面临巨大挑战。示踪病毒感染途径是研究病毒感染机制不可或缺的手段,而病毒的成功标记是实现病毒示踪的关键。常规的基因工程、直接化学偶联或病毒自组装等方法存在操作繁杂,标记效率低,普适性差和影响病毒活性等缺陷,难以推广应用。近年来,基于代谢工程的生物正交标记技术由于具有高效、特异、无损、稳定的优势,正日益成为标记活体生物系统的重要手段。该策略通过天然代谢途径在靶标物中引入特定的化学报告基团,然后通过生物正交反应与携带配对基团的标记物进行共价连接,从而实现对靶标物的特异标记。鉴于病毒衣壳蛋白合成依赖于宿主细胞,因此利用细胞氨基酸代谢可有效实现病毒衣壳修饰。为实现肠道病毒EV71高效无损的标记与示踪,本研究提出一种新型的基于氨基酸代谢的病毒原位生物正交标记技术,并利用该技术对肠道病毒EV71侵染机制进行深入探究。1.基于氨基酸代谢修饰的肠道病毒EV71生物正交标记技术的建立。利用宿主细胞氨基酸代谢将甲硫氨酸叠氮衍生物(L-Azidohomoalanine,Aha)嵌入子代病毒衣壳蛋白中,成功制备叠氮修饰的肠道病毒EV71(N3-EV71)。N3-EV71通过生物正交反应与携带二苯基环辛炔(DBCO)的荧光探针形成稳定连接,从而成功实现病毒的原位标记。结果表明,DBCO-探针能够高效、特异地捕获N3-EV71病毒粒子实现病毒标记,并且叠氮基团的代谢修饰和荧光探针的原位标记能有效保护病毒侵染活性,为后续病毒的动态示踪提供了可靠的技术手段。2.生物正交标记动态示踪研究肠道病毒EV71的侵染机制。我们运用SYTO染料与原位生物正交技术分别对病毒核酸与衣壳进行无损标记,实现病毒双重标记与动态示踪。结果显示,肠道病毒EV71与细胞表面清道夫受体结合后经网格蛋白介导的内吞入胞,并在晚期内涵体酸性环境中完成病毒核酸的快速释放,阐明了EV71病毒的侵染过程与脱衣壳机制。本研究提出并建立了一种新型的基于氨基酸代谢的原位生物正交标记技术,并利用该技术对肠道病毒EV71进行无损标记与动态示踪,成功阐明其侵染机制,为相关抗病毒药物的研制提供新的理论依据。
Abstract
chang dao bing du EV71(Enterovirus 71,EV71)zuo wei yin fa shou zu kou bing (Hand Foot Mouth Disease,HFMD)de zhu yao bing yuan ti ,ke dao zhi nao yan 、nao mo yan 、ji xing chi huan xing ma bi 、xin fei gong neng cui jie shen zhi si wang 。ran er ,mu qian dui chang dao bing du EV71gan ran ji zhi reng bu gou qing xi ,guo jia he she hui dui xiang guan ji bing de fang kong yi ran mian lin ju da tiao zhan 。shi zong bing du gan ran tu jing shi yan jiu bing du gan ran ji zhi bu ke huo que de shou duan ,er bing du de cheng gong biao ji shi shi xian bing du shi zong de guan jian 。chang gui de ji yin gong cheng 、zhi jie hua xue ou lian huo bing du zi zu zhuang deng fang fa cun zai cao zuo fan za ,biao ji xiao lv di ,pu kuo xing cha he ying xiang bing du huo xing deng que xian ,nan yi tui an ying yong 。jin nian lai ,ji yu dai xie gong cheng de sheng wu zheng jiao biao ji ji shu you yu ju you gao xiao 、te yi 、mo sun 、wen ding de you shi ,zheng ri yi cheng wei biao ji huo ti sheng wu ji tong de chong yao shou duan 。gai ce lve tong guo tian ran dai xie tu jing zai ba biao wu zhong yin ru te ding de hua xue bao gao ji tuan ,ran hou tong guo sheng wu zheng jiao fan ying yu xie dai pei dui ji tuan de biao ji wu jin hang gong jia lian jie ,cong er shi xian dui ba biao wu de te yi biao ji 。jian yu bing du yi ke dan bai ge cheng yi lai yu su zhu xi bao ,yin ci li yong xi bao an ji suan dai xie ke you xiao shi xian bing du yi ke xiu shi 。wei shi xian chang dao bing du EV71gao xiao mo sun de biao ji yu shi zong ,ben yan jiu di chu yi chong xin xing de ji yu an ji suan dai xie de bing du yuan wei sheng wu zheng jiao biao ji ji shu ,bing li yong gai ji shu dui chang dao bing du EV71qin ran ji zhi jin hang shen ru tan jiu 。1.ji yu an ji suan dai xie xiu shi de chang dao bing du EV71sheng wu zheng jiao biao ji ji shu de jian li 。li yong su zhu xi bao an ji suan dai xie jiang jia liu an suan die dan yan sheng wu (L-Azidohomoalanine,Aha)qian ru zi dai bing du yi ke dan bai zhong ,cheng gong zhi bei die dan xiu shi de chang dao bing du EV71(N3-EV71)。N3-EV71tong guo sheng wu zheng jiao fan ying yu xie dai er ben ji huan xin gui (DBCO)de ying guang tan zhen xing cheng wen ding lian jie ,cong er cheng gong shi xian bing du de yuan wei biao ji 。jie guo biao ming ,DBCO-tan zhen neng gou gao xiao 、te yi de bu huo N3-EV71bing du li zi shi xian bing du biao ji ,bing ju die dan ji tuan de dai xie xiu shi he ying guang tan zhen de yuan wei biao ji neng you xiao bao hu bing du qin ran huo xing ,wei hou xu bing du de dong tai shi zong di gong le ke kao de ji shu shou duan 。2.sheng wu zheng jiao biao ji dong tai shi zong yan jiu chang dao bing du EV71de qin ran ji zhi 。wo men yun yong SYTOran liao yu yuan wei sheng wu zheng jiao ji shu fen bie dui bing du he suan yu yi ke jin hang mo sun biao ji ,shi xian bing du shuang chong biao ji yu dong tai shi zong 。jie guo xian shi ,chang dao bing du EV71yu xi bao biao mian qing dao fu shou ti jie ge hou jing wang ge dan bai jie dao de nei tun ru bao ,bing zai wan ji nei han ti suan xing huan jing zhong wan cheng bing du he suan de kuai su shi fang ,chan ming le EV71bing du de qin ran guo cheng yu tuo yi ke ji zhi 。ben yan jiu di chu bing jian li le yi chong xin xing de ji yu an ji suan dai xie de yuan wei sheng wu zheng jiao biao ji ji shu ,bing li yong gai ji shu dui chang dao bing du EV71jin hang mo sun biao ji yu dong tai shi zong ,cheng gong chan ming ji qin ran ji zhi ,wei xiang guan kang bing du yao wu de yan zhi di gong xin de li lun yi ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)的王芳芳，发表于刊物中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)2019-06-10论文，是一篇关于氨基酸代谢论文,原位生物正交标记论文,病毒侵染论文,核酸释放论文,中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)2019-06-10论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)2019-06-10论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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