论文题目: 猫棒束孢菌抗真菌多肽和巨大口蘑抗真菌蛋白的分离纯化及特性的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 微生物学
作者: 郭永霞
导师: 王贺祥
关键词: 猫棒束孢菌,巨大口蘑,抗真菌活性
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 猫棒束孢菌（Isaria felina）是本实验室在栽培滑菇（Pholiota nameko）的过程中分离出来的一株污染菌,在PDA平板上它对棉花立枯病菌（Rhizoctonia solani）等多种植物病原真菌有明显的抑制作用。通过对其抗真菌活性物质的分离纯化,结构鉴定以其寻找一种全新的抗真菌物质。采用乙醇提取、YPR—Ⅱ大孔吸附树脂吸附、乙酸乙酯萃取、石油醚沉淀和重结晶的方法从I. felina菌丝体中分离纯化出对棉花立枯病菌（R. solani）生长有抑制作扩的无色松枝状结品样品isarfelin。每一步纯化后,其对油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）的抑制活性明显提高。Isarfelin的抗菌谱广,不仅可以抑制多种植物病原真菌的生长,对植物病原细菌桃树根癌病菌K27（Agrobacterium rhizogenes K27）也有很强的抑制作用,但对一些食用菌菌丝的生长没有影响。Isarfelin不仅对肿瘤细胞株MBL、L1210和hepG2有细胞毒性,而且对HIV-1逆转录酶（reverse transcriptase）有抑制作用。Isarfelin在pH4～10范围内活性稳定,热稳定,光不稳定。Isarfelin含有两个组分,分别是分子量为669.4178、分子式为C36H55O7N5的isarfelin A和分子量为655.4028、分子式为C35H53O7N5的isarfelin B,其中isarfelin A 占41.2%,isarfelin B 占58.8%,二者结构极其相似,仅相差一个CH2。扫描电镜观察isarfelin能引起油菜菌核病菌（S. sclerotiorum）菌丝生长异常、粗细不均匀、顶端膨大,新分支处菌丝生长受到抑制,但对细胞膜通透性和细胞呼吸作用没有影响。 关于Tricholoma giganteum子实体或菌丝体中生物活性物质已经有报道,通过对其子实体中抗真菌蛋白的分离纯化来丰富具有潜在应用前景的抗真菌蛋白资源。用DEAE-纤维素阴离子交换柱层析、Affi-gel蓝胶亲和柱层析、CM-纤维素阳离子交换柱层析和Superdex 75 FPLC凝胶过滤,从新鲜巨人口蘑（Tricholoma giganteum）子实体中分离纯化出抗真菌蛋白trichogin。它是一个分子量为27kDa的单亚基蛋白,其N端部分氨基酸顺序为QVHWPMF,与食用菌源抗真菌蛋白Alveolarin、Eryngin和Lyophyllum的N端顺序不同。和其他抗真菌蛋白一样,trichogin不能被DEAE-纤维素阴离子交换层析柱吸附,但能被Affi-gel蓝胶亲和层析柱和CM-纤维素阳离子交换层析柱吸附。Trichogin对植物病原真菌花生褐斑病菌（Mycosphaerella arachidicola）、棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum）和梨轮纹病菌（Physalospora piricola）菌丝的生长有抑制作用,对花生褐斑病菌（M. arachidicola）的IC50为3.84±0.28μmol/L。Trichogin还对HIV-1逆转录酶有抑制作用,但没有RNase活性和凝集素的活性。
论文目录:
摘要
Abstract
缩写
第一章 文献综述
1.1 生物防治在农业生产上的作用
1.1.1 抗生素类物质在生物防治中的作用
1.1.2 抗真菌蛋白在生物防治中的应用
1.2 抗真菌蛋白研究进展
1.3 环缩肽类生物活性物质研究进展
1.4 抗生素分离纯化方法
1.5 抗真菌蛋白的分离纯化
1.6 本研究的目的和意义
第二章 Isaria felina抗真菌多肽的分离纯化、结构鉴定及作用机理研究
2.1 材料
2.1.1 供试菌株
2.1.2 供试培养基
2.1.3 供试试剂
2.1.4 实验仪器
2.1.5 实验动物和昆虫
2.2 试验方法
2.2.1 定性分析isarfelin抗菌活性方法
2.2.2 定量分析isarfelin抗菌活性方法
2.2.3 Isarfelin的分离纯化
2.2.4 Isarfelin的生物活性
2.2.5 Isarfelin的理化性质
2.2.6 Isarfelin的结构分析
2.2.7 Isarfelin的作用机制
2.3 结果分析
2.3.1 Isarfelin的分离纯化
2.3.2 Isarfelin的生物活性
2.3.3 Isarfelin的理化性质
2.3.4 Isarfelin的结构分析
2.3.5 Isarfelin的作用机制
2.4 讨论
2.4.1 Isarfelin所含氨基酸分析
2.4.2 Isarfelin的分离纯化
2.4.3 Isarfelin的结构分析
2.4.4 Isarfelin A和isarfelin B与isariin、isariinB、C和D的比较
2.4.5 Isarfelin A和isarfelin B的结构推断
第三章 抗真菌蛋白trichogin的分离纯化及其它生物学功能的研究
3.1 材料
3.1.1 供试材料和菌种
3.1.2 供试培养基和试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 定性分析抗真菌蛋白活性
3.2.2 定量分析抗真菌蛋白活性
3.2.3 RNase的活性分析
3.2.4 HIV-1逆转录酶抑制活性测定
3.2.5 凝集素活性测定
3.2.6 抗真菌蛋白分离纯化
3.2.7 抗真菌蛋白SDS-PAGE纯度检测
3.2.8 抗真菌蛋白N-端部分氨基酸序列测定
3.3 结果与分析
3.3.1 抗真菌蛋白trichogin的分离纯化
3.3.2 抗真菌蛋白trichogin的抗真菌活性
3.3.3 抗真菌蛋白trichogin抑制HIV-1 RT的活性
3.3.4 抗真菌蛋白trichogin对血红细胞的凝集活性
3.3.5 抗真菌蛋白trichogin的RNase活性
3.4 讨论
3.4.1 抗真菌蛋白trichogin的分子量
3.4.2 抗真菌蛋白trichogin的分离纯化
3.4.3 抗真菌蛋白trichogin的抗真菌活性
3.4.4 抗真菌蛋白trichogin的其他生物活性
3.4.5 抗真凶蛋白triehogin的N-端部分氨基酸序列
第四章 结论
4.1 结论
4.2 进一步工作
参考文献
致谢
作者简介
发布时间: 2006-04-05
相关论文
- [1].食用菌抗病毒蛋白的特性、基因克隆与表达[D]. 付鸣佳.福建农林大学2002
- [2].腐生与共生食用菌菌丝体分离、培养及其DNA鉴定研究[D]. 曾东方.华中农业大学2000
- [3].茶树菇、鹿角炭角菌和砖红绒盖牛肝菌凝集素纯化及其免疫调节活性的研究[D]. 刘庆洪.中国农业大学2004
- [4].两种食用菌活性蛋白的分离纯化及其抗病特性[D]. 吴丽萍.福建农林大学2004
- [5].麻疯树（Jatropha curcas）种子抗真菌蛋白及相关基因的分离、表达研究[D]. 魏琴.四川大学2004
- [6].嗜水气单胞菌中聚羟基脂肪酸酯包涵体蛋白PhaP的研究[D]. 田树君.中国农业大学2005
- [7].苦瓜降糖多肽-P的分离纯化及降糖机理研究[D]. 盛清凯.江南大学2005
- [8].抗西洋参病原真菌蛋白的分离、纯化及其基因的合成和在大肠杆菌中的表达[D]. 任富成.中国协和医科大学1997
- [9].芽孢杆菌PY-1的菌种鉴定及其抗真菌产物的分离纯化、性质研究和结构鉴定[D]. 龚萌.四川大学2006
- [10].粘质沙雷氏菌杀虫蛋白的分离纯化及其基因的克隆与表达研究[D]. 陶科.四川大学2006