刺槐体细胞胚胎发生及植株再生的研究

论文摘要

本研究以刺槐的子叶为外植体全面系统地研究刺槐体细胞分化、发育,在此过程中建立了刺槐细胞胚胎发生及其植株再生的实验体系。运用石蜡切片观察了体细胞胚胎发生过程中的形态学和组织学的变化。同时研究了植物激素对体细胞胚胎发生的作用以及分化发育过程中细胞的生理生化代谢变化。测定SOD总酶活性与POD酶活性以及愈伤重量的日增长率,采用垂直平板聚丙烯酰胺电泳方法分析了胚性愈伤、非胚性愈伤及具分化能力的绿色愈伤同功酶酶谱变化,来确定刺槐最佳的植株再生体系,从而也丰富了植物组织培养的理论。具体结论如下:1刺槐诱导愈伤培养基最佳组合: MS+6-BA 1.0 mg·L-1+ 2.4-D 5.0 mg·L-1。2刺槐愈伤组织分化培养基最佳组合有两种:器官发生的最佳组合MS+6-BA 3.0 mg·L-1 + 2.4-D 0.1mg·L-1;胚状体发生的最佳组合MS+6-BA 0.1mg·L-1 + 2.4-D 1.0mg·L-1、MS+6-BA 0.1mg·L-1 + 2.4-D 3.0mg·L-1。3刺槐不定芽根系诱导培养基最佳组合:MS+ IAA 2.0 mg·L-1 + KT 1.0mg·L-1。4酶活性测定:刺槐的愈伤组织的褐化导致了SOD酶、POD酶的活性下降,使代谢缓慢,生长势减弱。用这两个指标也可以鉴定愈伤组织的长势的好坏。5酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶酶谱在刺槐不同类型的愈伤组织之间表现出的多态性,表明它们的组成和活性与刺槐愈伤组织的分化途径密切相关,可以有效地预测愈伤组织的分化途径。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1. 引言
• 1.1 植物组织培养的作用及发展简史
• 1.2 豆科植物组织培养现状
• 1.3 植物组织培养中的愈伤组织形成和形态发生的研究
• 1.3.1 植物组织培养中的愈伤组织形成
• 1.3.2 植物组织培养中的愈伤组织形态发生的研究
• 1.4 豆科植物体细胞胚胎发生的应用前景
• 1.4.1 原生质体培养
• 1.4.2 人工种子的制作
• 1.4.3 种质保存
• 1.4.4 基因转导
• 1.5 刺槐组织培养的研究
• 1.5.1 刺槐生物学特性
• 1.5.2 刺槐组织培养现状
• 1.6 研究目的、意义和内容
• 2. 材料和方法
• 2.1 材料表面灭菌及其培养条件
• 2.1.1 材料来源
• 2.1.2 外植体处理
• 2.1.3 培养条件
• 2.2 愈伤组织的诱导与生长指标的测定方法
• 2.2.1 愈伤组织的诱导
• 2.2.2 愈伤组织的诱导与生长指标的测定方法
• 2.3 体细胞胚成熟和分化
• 2.4 生根培养
• 2.5 移栽方法
• 2.6 石蜡切片
• 2.7 体细胞胚胎发生过程中两种同功酶的电泳分析
• 2.7.1 酶液制备
• 2.7.2 电泳
• 2.7.3 染色
• 2.8 数据处理方法
• 3. 结果与分析
• 3.1 刺槐愈伤组织诱导
• 3.1.1 不同种类植物激素及培养基对刺槐愈伤组织诱导的影响
• 3.1.2 不同种类植物激素及培养基对刺槐愈伤组织生长速率的影响
• 3.1.3 刺槐愈伤组织 SOD 总酶活性的分析
• 3.1.4 刺槐愈伤组织 POD 酶活性的分析
• 3.2 植物激素对刺槐器官发生的影响
• 3.3 植物激素不同浓度对刺槐不定芽根系的诱导的影响
• 3.4 植物激素对刺槐体细胞胚发生的影响
• 3.5 移栽
• 3.6 胚性愈伤和非胚性愈伤的同工酶分析
• 3.6.1 酯酶同功酶
• 3.6.2 过氧化物酶同工酶
• 3.7 刺槐组织培养形态发生的组织学和形态学的研究
• 3.7.1 刺槐器官发生过程中的形态学的观察
• 3.7.2 刺槐体细胞胚胎发生过程中的细胞组织学观察
• 4. 讨论
• 4.1 外植体的选择
• 4.2 培养基、植物激素的选择
• 4.3 指标选择
• 4.4 愈伤组织分化与成熟的分析
• 4.5 胚性与非胚性愈伤组织同工酶的差异分析
• 5. 结论
• 致谢
• 参考文献
• 图版
• 作者简介