论文摘要
LEAFY（简称LFY）基因是控制花分生组织形成的基因，在植物成花过程中具有重要的作用，研究发现它不仅决定着花由营养生长向生殖生长的转变，且其超量表达可以使植物的花期提前。DFL是甘菊中LFY同源基因，DFL基因在结构和表达模式上和其他植物的LFY基因相似。本研究对用转DFL基因烟草植株进行了分子鉴定。对转DFL基因烟草的鉴定研究为将该基因转入其他观赏植物，培育花期改变的优新品种提供参考。烟草转化的成功也为进行菊花的转化奠定了一定的技术基础。菊花是我国的传统名花，深受人们喜爱。菊花广泛的应用于园林绿化、美化的建设中，为了使菊花达到适时开花、适地开花、花随人意，花期调控的研究逐渐成为目前育种研究的一个重要方面。DFL基因是从菊属植物中和菊花近缘的种甘菊（Dendranthema lavandulifolium）中分离出来的，对于菊花转基因育种来说可以在一定程度上减少科属之间的差异，对培育我国具有自主知识产权的花期改良的菊花新品种具有实际意义。通过试验研究，取得了如下结果：1．对8株转DFL基因烟草进行PCR鉴定，发现了6株阳性植株；Southern杂交检测发现：3株烟草植株的基因组中已经整合进DFL基因；对转基因植株的开花期和植物学性状进行观测发现：转DFL基因烟草植株的花期有所改变，其中3株导入正义DFL基因的转基因植株花期提前15-23天；部分烟草植株发生形态学性状的变异，如叶片褶皱，叶色发黄。对转基因烟草植株的种子进行抗生素的筛选，烟草种子可以在附加50mg／L潮霉素的培养基上发芽生长。2．对三个菊花品种‘荷兰白’，SA（‘SAFFRON’），SW（‘SWING TIME’）用叶盘法进行了分化再生试验。试验结果表明：‘荷兰白’、SA品种的再生率较低，SW品种的再生率较高（75％），本文选择SW品种作为转化试验的材料。3．建立了稳定高效的菊花再生体系。用SW品种做为试验材料进行分化和再生试验，选择叶片为外作为转基因试验的外植体。叶片诱导不定芽再生的培养基最佳配方是：MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.2mg／L，再生率可达75％。最佳的生根培养基为1／2MS+NAA0.2mg／L，生根与移栽试验中成活率为90％以上。4．研究讨论了菊花品种SW对抗生素的敏感性。结果表明：SW品种叶片对潮霉素较敏感，选择潮霉素5mg／L为叶盘的最佳筛选浓度，选择潮霉素5mg／L为生根的最佳筛选浓度。本实验选择羧苄青霉素（Carb）作为遗传转化中的脱菌剂，合适的浓度为200-500mg／L。5．通过试验建立了菊花品种SW遗传转化体系：使用农杆菌（菌株为EHA105）转化菊花，取组培苗的叶片进行0—3d的预培养，OD600为0.4—0.6左右的农杆菌侵染叶盘15分钟左右，转入共培养培养基暗培养1—4天，转至延迟培养基上，25℃光培养2天，再将叶片转接至筛选培养基上，25℃光培养。以后每20天继代，期间观察其分化生长情况。待抗性芽长出，在添加3—5mg／L潮霉素的生根培养基中培养。