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高产谷胱甘肽菌种的选育及反-2-壬烯醛检测的研究

2020-12-08阅读(1017)

高产谷胱甘肽菌种的选育及反-2-壬烯醛检测的研究

论文摘要

本研究以啤酒中的谷胱甘肽（GSH）和反-2-壬烯醛为检测指标,采用液相色谱的手段,建立两种物质测定的方法;以低产双乙酰啤酒酵母SL为出发菌株,采用甲基磺酸乙酯（EMS）诱变,以氯化锌和甲硫氨酸为筛子筛选高产谷胱甘肽的酵母菌株。主要取得以下研究成果:（1）高效液相色谱检测啤酒中谷胱甘肽的方法是:流动相为磷酸二氢钠溶液（0.6%,pH=3.5）:甲醇=96:4（V:V）;流动相的pH为3.5;最佳流速是0.8mL/min;谷检测波长是225nm;所用色谱柱为SB-C18;进样体积10μL。该方法在50mg/L-400mg/L线性关系较好,线性相关系数到达0.9988.回收率93.4%-96.3%,RSD%小于2%。同时,与亚硝基铁氰化钠法、DTNB法和四氧嘧啶法相比,该方法的精密度和回收率较高。（2）高效液相色谱法检测啤酒中反-2-壬烯醛的方法是:流动相:甲醇:水=60:40（V/V）;流速为1mL/min;色谱柱SB-C18柱（Agilent4.6mm×250mm,5μm）;检测波长226nm;进样体积10μL;蒸馏前在啤酒中加入3g氯化钠,收集蒸馏液的体积为20mL;用乙腈洗脱,洗脱速率为2mL/min;该方法线性关系较好,相关系数为0.9971;回收率88.3%-90.0%,RSD%为3.7%。（3）EMS的最佳诱变条件是:EMS的体积分数为45μL/mL,作用时间为30min,在该条件下,其致死率为82.28%。氯化锌及甲硫氨酸的最佳使用浓度分别为0.8g/L、18g/L。在此浓度下,致死率分别为87.86%、89.26%。（4）通过以上条件,筛选出一株发酵性能良好、谷胱甘肽含量高、遗传稳定性好的突变株SL-31。（5）小试试验表明,突变株SL-31与出发菌株SL相比,降糖能力、双乙酰还原能力略强,啤酒各项风味物质含量中乙醛、异戊醇的含量明显降低,乙酸乙酯的含量略有增加,GSH的含量较出发株提高了34.5%,TBA含量降低了29.0%,RSV提高了39.4%。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACTS
  • 第一章 文献综述
  • 1.1 啤酒工业的发展概况
  • 1.2 啤酒老化的研究进展
  • 1.2.1 啤酒的老化机制
  • 1.2.2 啤酒中老化物质的种类
  • 1.3 改善啤酒风味和提高啤酒风味稳定性的方法
  • 1.3.1 啤酒酵母菌种的改造
  • 1.3.2 酵母的添加
  • 1.3.3 抗氧化剂的添加
  • 1.4 本课题的研究目的
  • 1.5 本课题的研究内容
  • 1.6 研究的技术路线
  • 第二章 高效液相色谱法检测发酵液中还原型谷胱甘肽的研究
  • 2.1 材料与方法
  • 2.1.1 仪器与试剂
  • 2.1.2 溶液的配制
  • 2.1.3 试验方法
  • 2.2 结果与分析
  • 2.2.1 色谱柱的选择
  • 2.2.2 流动相比例及pH、流速的确定
  • 2.2.3 吸收波长的选择
  • 2.2.4 分析方法的线性范围
  • 2.2.5 方法的加标回收率
  • 2.2.6 方法的精密度
  • 2.2.7 各测定方法的重复性比较
  • 2.2.8 各测定方法的回收率的比较
  • 2.3 小结
  • 第三章 固相萃取高效液相色谱法检测反-2-壬烯醛
  • 3.1 材料与方法
  • 3.1.1 试剂及仪器
  • 3.1.2 溶液的配制
  • 3.2 试验方法
  • 3.2.1 固相萃取柱的活化
  • 3.2.2 色谱柱的选择
  • 3.2.4 吸收波长的选择
  • 3.2.5 标准曲线的绘制
  • 3.2.6 方法的回收率
  • 3.2.7 方法的精密度
  • 3.2.8 萃取方式的选择
  • 3.2.9 收集流出液体积的确定
  • 3.2.10 洗脱剂的选择
  • 3.2.11 盐的添加量
  • 3.2.12 萃取速率的选择
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 色谱条件的确定
  • 3.3.2 样品前处理条件的确定
  • 3.4 小结
  • 第四章 高产谷胱甘肽菌种的选育
  • 4.1 材料与方法
  • 4.1.1 材料
  • 4.1.2 溶液的配制
  • 4.1.3 试验方法
  • 4.1.4 分析方法
  • 4.2 结果与分析
  • 4.2.1 EMS 诱变条件
  • 4.2.2 氯化锌物浓度的确定
  • 4.2.3 甲硫氨酸浓度的确定
  • 4.2.4 突变菌株复筛
  • 4.3 小结
  • 第五章 突变株的小试试验
  • 5.1 材料与方法
  • 5.1.1 材料
  • 5.1.2 试验方法
  • 5.1.3 分析方法
  • 5.2 结果与分析
  • 5.2.1 发酵过程中糖度、双乙酰还原能力的测定结果
  • 5.2.2 发酵结束后，发酵液中GSH 的含量
  • 5.2.3 发酵结束后，发酵液中TBA 值
  • 5.2.4 发酵结束后发酵液中RSV 的值
  • 5.2.5 发酵结束后，5-羟甲基糠醛及反-2-壬烯醛的含量
  • 5.2.6 发酵结束后，发酵液中风味物质成分及含量
  • 5.3 小结
  • 第六章 结论与创新
  • 6.1 结论
  • 6.2 本课题的创新之处
  • 参考文献
  • 致谢
  • 个人简介

    • 相关论文文献

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