HLA-G与卵巢癌的相关性研究

论文摘要

目的:人类白细胞抗原G（human leukocyte antigen-G,HLA-G）属于非经典的HLA-Ⅰ类分子,最早在胎盘绒毛外滋养层细胞中发现,其在母胎免疫耐受中的作用已得到证实。在过去的几年里,HLA-G的研究已从单纯的生殖领域扩展到了器官移植、自体免疫性疾病和肿瘤研究等领域。HLA-G与肿瘤的免疫逃逸已成为肿瘤学领域备受关注的焦点。卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一。卵巢癌肿瘤细胞减灭术及以铂类为主的联合化疗是目前卵巢癌的主要治疗手段。由于卵巢癌具有发现晚,手术不易彻底,术后易复发的特点,故其五年生存率仍较低。因此,寻找对卵巢癌有效的治疗药物是提高患者生存期的关键。该研究目的在于探讨HLA-G与卵巢癌免疫逃逸的关系,从下调HLA-G的表达,抑制其参与肿瘤免疫逃逸的角度寻求治疗药物和方案。方法:1采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术和流式细胞术检测50例卵巢癌组织、30例良性卵巢肿瘤及10例正常卵巢组织中HLA-G mRNA和蛋白的表达。2体外培养人卵巢癌细胞OVCAR3,建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。3待肿瘤生长至接种后第二周,肿瘤界限清楚后,将28只裸鼠随机分为4组,每组7只。分别为对照组、顺铂组、米非司酮组和联合用药组。4实验过程中注意观察裸鼠的饮食、活动、反应等情况。记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率。5采用RT-PCR技术和流式细胞术检测各组裸鼠移植瘤标本HLA-G mRNA和蛋白的表达。结果:1 50例卵巢癌、30例良性卵巢肿瘤及10例正常卵巢组织RT-PCR检测结果:恶性组HLA-G mRNA的阳性表达率为92.00%,良性组为66.67%,正常组为60.00%,恶性组阳性表达率高于良性组和正常组（分别为p<0.05,p<0.05）。HLA-G mRNA在不同类型的卵巢癌组织中阳性表达率无显著性差异（p>0.05）;早期和晚期卵巢癌阳性表达率分别为76.92%、97.30%,差异无显著性（p>0.05）;HLA-G mRNA在高分化组卵巢癌中阳性表达率为62.50%,中分化组和低分化组分别为96.30%、100.00%,高分化组的阳性表达率低于中、低分化组（分别为p<0.05,p<0.05）。2采用流式细胞术检测50例卵巢癌、30例良性卵巢肿瘤及10例正常卵巢组织HLA-G蛋白的表达:恶性组阳性表达率为64.00%,良性组和正常卵巢组织分别为16.67%、10.00%,恶性组HLA-G蛋白的阳性表达率高于良性组和正常组（分别为p<0.01,p<0.01）。HLA-G蛋白在不同类型的卵巢癌组织中阳性表达率无显著性差异（p>0.05）;早期和晚期卵巢癌阳性表达率分别为30.77%、75.68%,差异有显著性（p<0.05）;HLA-G蛋白在不同分化程度的卵巢癌中阳性表达率分别为:高分化组37.50%,中分化组55.56%,低分化组93.71%,低分化组的阳性表达率高于高、中分化组（分别为p<0.05,p<0.05）。3不同治疗组裸鼠移植瘤体积比较:对照组、顺铂组、米非司酮组及联合组肿瘤体积分别为6100.83±600.69mm3、3491.40±320.13 mm3、3689.30±417.66mm3、2532.55±252.56mm3,抑瘤率分别为0.00%、42.77%、39.53%、58.49%。其它三组裸鼠移植瘤体积均明显小于对照组（均为p<0.01）;顺铂组和米非司酮组分别与联合组比较,差异有显著性（分别为p<0.01,p<0.01）。4 RT-PCR技术检测人卵巢癌细胞OVCAR3裸鼠移植瘤组织HLA-G mRNA的表达:对照组、顺铂组、米非司酮组和联合组HLA-G mRNA表达量分别为1.01±0.17、0.89±0.11、0.62±0.10、0.49±0.10。顺铂组和对照组相比,差异无显著性（p>0.05）;米非司酮组HLA-G mRNA的表达低于对照组（p<0.01）,但和联合组比较,差异无显著性（p>0.05）。5流式细胞术检测人卵巢癌细胞OVCAR3裸鼠移植瘤组织HLA-G蛋白的表达:对照组、顺铂组、米非司酮组和联合组HLA-G蛋白表达量分别为2.38±0.43、2.29±0.35、1.26±0.31、1.08±0.25。顺铂组和对照组相比,差异无显著性（p>0.05）;米非司酮组HLA-G蛋白的表达低于对照组（p<0.01）,但和联合组比较,差异无显著性（p>0.05）。结论:1恶性组HLA-G抗原的阳性表达率高于良性组和正常组,卵巢癌的分化程度越低,期别越晚,HLA-G抗原的表达率越高,表明HLA-G与卵巢癌的发生发展和恶性转化密切相关,可能参与了卵巢癌的免疫逃逸。HLA-G可作为判断预后的参考指标,并为卵巢癌的免疫治疗提供理论依据。2米非司酮可抑制裸鼠人卵巢癌细胞OVCAR3移植瘤的生长,表明米非司酮具有抗肿瘤活性。米非司酮和顺铂联合应用,抑瘤效果更强。3米非司酮可下调裸鼠卵巢癌模型移植瘤组织中HLA-G的表达。米非司酮可能是通过下调HLA-G的表达解除对机体免疫活性细胞的抑制,恢复其对肿瘤细胞的杀伤,从而遏制肿瘤的生长,这可能是米非司酮发挥抗癌作用的机制之一,为卵巢癌患者尤其是高表达HLA-G者的治疗提供了理论依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写
• 研究论文 HLA-G 与卵巢癌的相关性研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 HLA-G 结构与功能的研究概况
• 致谢
• 个人简历