论文摘要
结核病是由结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的一种古老的传染病，目前仍是世界上引起死亡的最主要的疾病之一。目前，全球大约有1／3的人口有潜伏期结核分枝杆菌的感染，而大部分新的结核病例是由潜伏期的结核分枝杆菌的活化引起的。虽然结核病的化疗方案在结核病的控制中起了很大作用，但其主要对活动性结核病起作用，对潜伏期的结核分枝杆菌的感染则作用不大。因此，了解MTB持留的机制，研究其持留相关基因，将对结核病的治疗意义重大。研究结果提示，很多不同种属的病原菌都具有形成潜在感染的能力，可能与原核生物染色体基因组上保守的TA系统有关，其主要由毒素和抗毒素位点组成，被认为是原核生物基因表达的质量控制系统。该系统包括7个两组分基因家族（ccd、re1BE、parDE、higBA、mazEF、phd／doc、vapBC）和1个三组分家族（ω—ε—ξ），这些家族间蛋白序列表现出较高的相似性，并且有各自的模块。Gerdes等通过生物信息学方法发现在结核杆菌H37Rv株中含有38个TA loci，其中包括9个mazEF位点。为研究TA家族与结核杆菌潜伏感染之间的关系，我们选取了其中的一组可能的mazEF位点Rv1494和Rv1495。经过生物信息学分析，Rv1494和Rv1495基因表达的蛋白所具有的模块与TA家族中的常见模块一致。我们首先从基因组中扩增出这两个基因片段，并在原核融合表达载体pET32a（+）中成功表达了相应的融合蛋白。同时我们还克隆了Rv1494-Rv1495融合基因，并将其重组到穿梭表达载体pMV261中，经电转化导入无毒的耻垢分枝杆菌（mc2155）中，并在重组耻垢分枝杆菌（Rmc2155）中成功表达了11KD的Rv1494-Rv1495编码蛋白。本研究还对负载空质粒pMV261的耻垢分枝杆菌及负载重组质粒的耻垢分枝杆菌在生长曲线、酸压力及热压力方面作了比较。综上所述，本研究首次对结核分枝杆菌Rv1494和Rv1495基因进行了克隆和表达，同时构建了重组的穿梭质粒pMV261-（Rv1494-Rv1495），并将其转化入耻垢分枝杆菌中，对重组耻垢分枝杆菌MCEF功能进行了初步的研究。结果提示，Rv1494-Rv1495可能对结核杆菌在抵抗外界压力以维持其潜伏感染中有一定作用。