应用消碱杂交技术研究非小细胞肺癌基因表达谱的变化和TIG2基因生物学功能的研究

论文摘要

随着人类基因组测序的逐步完成,功能基因组的研究成为今后的主要研究方向之一。我们采用消减杂交技术（Subtractive Hybridization）筛选与肺癌发生、发展相关的功能基因,通过临床病人肺癌组织与其癌旁正常组织基因表达谱的变化,构建差异表达的cDNA文库,经测序和RT-PCR验证,筛选出与肺癌有重要贡献的一组基因。我们从中选择TIG2（Tazaroteneinduced gene 2）基因深入研究其对肺癌发生、发展的作用。 经RT-PCR,我们发现TIG2 mRNA在肺癌细胞中低表达或沉默,而在正常肺细胞呈程序性中表达。从正常肺细胞WI-38中克隆TIG2 cDNA,通过体外构建哺乳动物表达重组质粒（pFLAG-CMV/TIG2;pCI-neo/TIG2）,然后分别转染肺癌细胞（A2,LH7）,免疫荧光揭示TIG2编码蛋白主要定位于细胞质内,且分泌出去。培养的肺癌细胞（A2,LH7,BE1）经维甲酸不同浓度处理,发现TIG2基因仍表达沉默,因此,肺癌细胞（A2,LH7,BE1）是维甲酸无应答细胞;然后经去甲基化试剂（5-Aza-CdR）处理后,发现TIG2基因获得重新表达,因此,推断TIG2基因在肺癌细胞中表达沉默与DNA甲基化有关,经CpG岛软件预测,发现TIG2基因调控区存在CpG岛,文献报道,在肺癌细胞中,维甲酸受体β（RARβ）常出现甲基化,抑制其表达,所以,TIG2基因的表达沉默可能与RARβ和/或TIG2甲基化有关。对稳定转染TIG2 cDNA的肺癌细胞株（LH7-TIG2）功能变化作深入研究,流式细胞仪分析其细胞周期,与稳定转染相应空载质粒肺癌细胞株（LH7-mock）比较,发现G1期细胞数明显增加（25%→49%）,G2/M期明显下降（18.18%→8.00%）;LH7-TIG2细胞增殖和侵袭能力明显减弱等。同时,TIG2基因的表达使ERK2（p42）活性降低或消失。综合以上实验结果初步

论文目录

• 一、摘要
• 1.中文论著摘要
• 2.英文论著摘要
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 1.前言
• 2.研究内容及实验结果
• 3.讨论
• 4.结论
• 5.本研究创新性的自我评价
• 6.参考文献
• 四、附录
• 1.综述
• 2.在学期间科研成绩
• 3.致谢
• 4.个人简介