论文摘要
目的：建立大鼠溃疡性结肠炎模型，研究中药复方肠宁汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中MDA、SOD及血清中SIgA和IgG表达的影响，并探讨中药对防治溃疡性结肠炎可能的作用机制，为肠宁汤的临床应用和进一步开发提供动物实验数据。方法：健康SD大鼠若干只，随机分为4组：A组（中药治疗组）、B组（西药治疗组）、C组（生理盐水组）、D组（空白对照组）。其中A、B、C组采用复合法造成溃疡性结肠炎大鼠模型，造模完成后每日给与常规饮食，不与任何干预，观察2周。空白对照组造模前后均予常规饮食，不给任何干预。造模成功后，A组按体重给予肠宁汤水煎剂灌胃；B组灌服SASP溶液，C组给予生理盐水灌胃；以上灌胃均每日一次，共治疗4周。D组不给任何干预。标本采集分两次进行：第一次：造模完成后，治疗开始前一天，大鼠禁食不禁水24小时后，随机抽取A、B、C组大鼠各10只，D组6只，摘眼球取血6ml，置于预先标记好的试管中做SIgA、IgG检测，采血后脱颈椎处死，立即打开腹腔，截取距肛门以上6～8cm病变处结肠，沿纵轴中线一分为二，投入到事先准备好的装有4％多聚甲醛固定液的小瓶中，4℃保存。其中一份常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察；另一分留做组织匀浆，测SOD及MDA。第二次采集标本：治疗满4周，实验结束前一天记录大鼠体重，大鼠禁食不禁水24小时后，所有大鼠均摘眼球取血，取血后处死，剖腹取结肠。方法及处理同第一次标本采集。结果：1肠宁汤对溃疡性结肠炎大鼠一般状况的影响治疗2周后，A组进食量开始增加，大便性状好转，未再见粘液脓血便，但部分大鼠仍可见稀便；B组进食量无明显增加，粘液脓血便减少，部分大鼠仍有稀糊状大便。治疗4周后，A组大鼠未再出现稀便，活动正常，皮毛恢复光泽，体重明显增加；B组大便性状明显好转，活动正常，皮毛光泽，体重增加。C组治疗2周后大便性状、进食量等无明显改善，体重进一步下降；至4周后，仍见部分大鼠大便呈稀糊状，并有精神倦怠、反应迟钝、皮毛疏松无光泽等表现。D组大鼠一般状况良好，体重明显增加。2肠宁汤对UC大鼠结肠粘膜损伤指数（CMDI分）的影响治疗前A、B、C三组大鼠CMDI（分）较D组显著升高（P＜0.01）；治疗后，A、B两组CMDI（分）显著降低，与D组比较无明显差异（P＞0.05）；与C组比较有显著差异（P＜0.05）3病理结构观察治疗前，结肠标本HE染色显示：A、B、C三组粘膜及粘膜下层高度充血、水肿，有糜烂和溃疡形成，局部见坏死。大量炎性细胞、嗜酸性细胞浸润，腺体中杯状细胞显著减少。治疗后A、B两组粘膜充血水肿消失，糜烂和溃疡基本愈合，残存溃疡有明显修复性改变，如粘膜上皮修复，肉芽组织增生等。炎性细胞浸润亦有所缓解。C组无明显变化。4肠宁汤对UC大鼠结肠组织中MDA、SOD表达的影响各组大鼠中，A组和B组大鼠结肠组织中MDA含量均显著降低，与C组比较有极显著差异（P＜0.01）；中药组同时能明显提高结肠组织中SOD含量，与西药组、生理盐水组比较均有显著差异（P＜0.05）。5肠宁汤对UC大鼠血清IgG、SIgA的影响造模后，A、B、C三组大鼠血清中IgG、SIgA较D组显著上升（P＜0.05）；用药治疗后，A组和B组的SIgG、SIgA含量较C组显著减少（P＜0.01），A组与B组比较，血清中SIgA、IgG含量无显著性差异（P＞0.05）。结论：采用2，4-二硝基氯苯+乙酸联合建模法，既克服了DNCB病程短、自愈性强的缺点，也克服了乙酸法不具有免疫反应模型特征的缺点，又同时保留了二者症状、组织学改变与人类UC相似的优点，是一种较理想的UC模型。通过实验发现：肠宁汤方能明显降低结肠组织的丙二醛（MDA）含量，提高超氧化物歧化酶（SOD）的活性；显著降低血清中及SIgA、IgG含量，可明显改善肠粘膜的超微结构，有效修复UC大鼠损伤的结肠黏膜。初步证明了氧自由基诱发的脂质过氧化反应、免疫异常在UC发病机理中起重要作用，揭示肠宁汤治疗UC的部分机理可能是通过消除组织中的氧自由基，抑制组织中脂质过氧化反应，提高组织中SOD的活性、改善免疫异常反应而起作用。进一步深入研究肠宁汤方防治UC的作用机制，尽快开发出方便有效的成药是我们今后工作的重点。