论文摘要
视黄酸（RA）是维生素A的活性代谢产物并且具有一些重要的生理功能包括细胞增殖和凋亡、细胞分化和组织形态学变化。RA的合成和分解主要受视黄醛脱氢酶（RALDHs）和细胞色素P450家族Cyp26氧化酶（Cyp26s）中Aldh1a2和Cyp26a1这两个主效基因的调控,他们共同协调维持动物体内RA的稳态。RA广泛参与胚胎发生和生长等重要生物学进程,过多或过少的RA对成体动物的视觉、皮肤、免疫、生殖、神经等系统的正常功能都有影响,他的这些特性已使他被开发利用于皮肤病等众多疾病的临床治疗,并使其成为预防癌症和分化治疗的一大候选分子。补体由血浆补体成分、可溶性和膜型补体调节蛋白、补体受体等30余种糖蛋白组成,是一个具有精密调控机制的蛋白质反应系统。该系统可通过3条既相对独立又相互联系的途径被激活,从而发挥调理吞噬、裂解细胞、介导炎症、免疫调节和清除免疫复合物等多种生物学效应。C4是补体经典激活途径的一个重要组分,由两个基因C4A和C4B所编码。本实验利用RACE巢式PCR技术克隆了洪泽湖鹅的视黄酸新陈代谢酶的Aldh1a2和Cyp26a1和补体C4-1这三个基因的cDNA序列,利用生物信息学方法预测了蛋白的结果和功能,并进行了同源性序列多重比对和分子系统发生分析。利用实时荧光定量（Real-time） PCR技术分别测定了Aldh1a2、Cyp26a1、C4-1在成体鹅各主要组织器官中mRNA相对表达水平。为研究鹅的Aldh1a2、Cyp26a1、C4-1基因的生物学功能和科学应用提供基础的基因信息,并探讨了克隆的基因在物种进化进程中的同源性,也为研究人类患相关疾病建立动物实验模型提供医学参考。1Aldhla2, Cyp26a1和C4-1基因的克隆测序分别用多种动物的基因核苷酸序列通过JELLYFISH上BLAST同源性检索,获得相关的序列,基此设计RACE引物,利用RACE技术克隆测序,获得鹅Aldh1a2基因的cDNA全序列,长度为3369bp；获得Cyp26a1基因的cDNA部分序列,长度为1328bp；获得C4-1基因的cDNA全序列,长度为4979bp。2Aldh1a2, Cyp26a1和C4-1蛋白的生物信息学分析借助生物信息学网络资源和软件,预测出鹅Aldh1a2基因开放阅读框的长度为1500bp bp,编码500个氨基酸残基,且两侧分别是112bp的5’UTR和1757bp的3’UTR；预测出Cyp26a1基因部分长度为1058bp,3’UTR为270bp；预测出C4-1基因开放阅读框的长度为4899bp,编码1633个氨基酸的蛋白,且两侧分别是80bp的5’UTR和0bp的3’UTR。推测蛋白具有DNA结合活性,参与基因转录调控。3Aldh1a2、Cyp26a1、C4-1基因在不同组织的表达采用实时荧光定量PCR技术,分别分析了鹅Aldh1a2、Cyp26a1、C4-1基因在不同组织中的相对表达水平,结果表明：Aldh1a2、Cyp26a1、C4-1基因在鹅的不同组织中广泛表达,但表达水平存在差异。推测三者主要在肝中合成,Aldh1a2和Cyp26a1基因共同协调主要对生殖细胞等的发育和功能维持过程具有重要作用；C4-1基因主要对免疫功能维持过程具有重要作用。
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相关论文文献
- [1].ALDH1A2基因过表达对结肠癌移植瘤生长的影响[J]. 武汉大学学报(医学版) 2013(03)
- [2].ALDH1A2、MMP2和E-cadherin在结肠癌组织中的表达及相关性[J]. 世界华人消化杂志 2013(04)