论文摘要
目的:转移是导致大多数肿瘤患者死亡的主要原因,肿瘤转移机制及防治已成为当今重要的研究课题。目前认为,肿瘤的转移与其发生一样,也涉及肿瘤细胞多个基因的改变。其中抑癌基因的丢失和失活,可引起肿瘤细胞发生发展及侵袭转移的表型出现。候选抑癌基因Annexin7 （ANX7）位于人类染色体10q21.1-21.2,属于钙依赖的磷脂膜结合蛋白的膜联蛋白家族成员,在亚细胞水平定位于细胞核和胞液中,参与细胞外分泌、嗜铬颗粒的聚集及信号转导等,并与肿瘤进展和预后密切相关。UCH-L3属泛素C-末端水解酶家族,泛素系统作用于细胞周期、转录活性、增殖及凋亡等生理病理过程。UCH-L3与肿瘤的关系研究甚少,目前尚未见有其与肿瘤转移相关联的报告。本研究观察ANX7、UCH-L3基因编码蛋白在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株（Hca-F、Hca-P）中的表达水平,分析它们在这两个细胞株中表达的关系及意义,以进一步探讨ANX7、UCH-L3基因在肿瘤转移过程中的作用及相关的分子病理学机制。方法:以小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移株（Hca-F）和低转移株（Hca-P）为研究对象,采用Western Blot、免疫细胞化学和流式细胞仪分别检测ANX7蛋白、UCH-L3蛋白在Hca-F和Hca-P两细胞株的表达。结果:1.蛋白质浓度测定:运用超声破碎法处理细胞,测得Hca-F总蛋白浓度为6.06μg/μl,Hca-P为2.48μg/μl。2.Western Blot结果:ANX7蛋白在Hca-F细胞中表达的表达相对值为0.0895,显著低于Hca-P中的0.226（P<0.01）;UCH-L3蛋白在Hca-F中的表达相对值是0.158,显著低于Hca-P中的0.292（P<0.01）。3.免疫细胞化学显示,Hca-F细胞中ANX7蛋白可定位于胞核和胞浆,但主要位于胞核,在Hca-P细胞中主要定位于胞浆。ANX7蛋白在两细胞株（Hca-F、Hca-P）的IOD均值分别为10862.62和1633.68;UCH-L3蛋白在Hca-F、Hca-P细胞中均主要定位于胞浆,UCH-L3在两细胞株（Hca-F、Hca-P）的IOD均值分别为21652.17和49693.65。ANX7蛋白在Hca-F细胞中的表达明显高于Hca-P（P<0.001）;UCH-L3蛋白Hca-F中的表达明显低于Hca-P（P<0.001）。4.流式细胞仪结果:ANX7蛋白在Hca-F和Hca-P中的RFI均值分别为57.705和17.605;UCH-L3蛋白在Hca-F、Hca-P中的RFI均值分别为2173.606和3868.10。Hca-F细胞中ANX7蛋白的表达高于Hca-P（P<0.01）;UCH-L3蛋白在Hca-F中的表达显著低于Hca-P（P<0.001）。结论:实验结果表明,ANX7蛋白在Hca-F细胞中的表达显著高于其在Hca-P中的表达,提示ANX7蛋白可能在促进肿瘤淋巴道转移中发挥作用; UCH-L3蛋白在Hca-F细胞中的表达显著低于其在Hca-P中的表达,UCH-L3蛋白可能与肿瘤淋巴道转移相关,但两者的机制还需深入研究。