膀胱尿路上皮癌CCR7表达的意义

论文摘要

第一部分膀胱尿路上皮癌CCR7的表达与淋巴结转移的关系目的研究膀胱尿路上皮癌中CCR7蛋白的表达情况,探讨CCR7蛋白表达与淋巴结转移的相关性以及CCR7蛋白表达与肿瘤的分期、分级等临床参数的关系。方法采用免疫组化染色的方法研究了57例膀胱尿路上皮癌的手术标本以及10例正常膀胱组织标本的CCR7蛋白表达,并进行半定量分析研究CCR7在膀胱肿瘤中的表达是否异常,同时采用统计学分析CCR7蛋白表达与淋巴结转移的关系,与肿瘤分期、分级等临床参数之间的关系,并研究了淋巴结转移的影响因素。结果57例膀胱尿路上皮癌患者的CCR7蛋白表达阳性率为82.5%,明显高于正常膀胱组织中CCR7蛋白的阳性率（20%）；在肿瘤患者中,淋巴结转移组CCR7蛋白的阳性率为95.5%,明显高于淋巴结未转移组CCR7蛋白的阳性率（74.3%）；CCR7蛋白在高分期肿瘤（T3-T4）中的阳性率显著高于低分期肿瘤（T1-T2） （91.2% vs.69.9%）,在高分级肿瘤（G3）中的阳性率显著高于低分期肿瘤（G1-G2）（87.5% vs.76.0%）, CCR7在其他临床参数中的比较无统计学意义；CCR7蛋白表达、肿瘤分期、肿瘤分级与淋巴结是否转移相关；仅CCR7是淋巴结转移的独立影响因素。结论CCR7蛋白在膀胱尿路上皮癌中表达异常增加,与淋巴结转移成正相关,是淋巴结转移的独立影响因素。第二部分CCL21/CCR7对T24细胞生物学行为的影响目的研究CCL21/CCR7对T24细胞迁移、侵袭、增殖以及抗凋亡能力的影响。方法采用不同浓度的CCL21 （0,50,100,200ng/mL）作用T24细胞,用Transwell实验研究CCL21对T24细胞的迁移与侵袭能力；用MTT法研究了CCL21对T24细胞的增殖能力的影响,用FCM研究了CCL21对T24细胞抵抗ADM诱导的细胞凋亡,同时用western blot检测了侵袭相关蛋白MMP-2与MMP-9表达及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达；实验中使用CCR7抗体评估了CCL21作用于T24细胞产生的影响对CCR7的依赖性。结果CCL21作用于T24细胞能增强其迁移和侵袭能力,增强效果依赖于CCL21的浓度,CCL21能增加MMP-2与MMP-9的表达；CCL21还能促进T24细胞的增殖与抗凋亡能力,并能上调Bcl-2蛋白的表达,而抑制Bax蛋白的表达。上述CCL21对T24细胞的影响都依赖于CCR7受体的活性。结论CCL21/CCR7增强了T24细胞的迁移与侵袭能力,促进了T24细胞的增殖与抗凋亡。第三部分CCR7与VEGF-C在膀胱尿路上皮癌表达的关系目的研究膀胱尿路上皮癌中CCR7蛋白与VEGF-C蛋白表达的相关性,并探讨CCL21/CCR7轴对T24细胞VEGF-C分泌的影响。方法采用免疫组化染色的方法研究了57例膀胱尿路上皮癌的手术标本CCR7蛋白和VEGF-C蛋白表达的相关性,采用RT-PCR研究了CCL21对T24细胞VEGF-C mRNA表达的影响,用Western blot研究了CCL21对T24细胞、VEGF-C蛋白表达的影响,同时还研究了对RNA结合蛋白HuR的影响。结果57例膀胱尿路上皮癌患者的CCR7蛋白与VEGF-C蛋白的表达成正相关,相关系数为0.309；CCL21作用于T24细胞对VEGF-C mRNA的表达没有明显的影响（P=0.645）但对VEGF-C蛋白的表达有显著的影响（P<0.001）,同时也明显上调了HuR蛋白的表达（P=0.003）。结论CCL21/CCR7可能通过对转录后水平的调控增加了T24细胞VEGF-C蛋白的表达。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略语表
• 目录
• 前言
• 第一部分 膀胱尿路上皮癌CCR7表达与淋巴结转移的关系
• 1.1 前言
• 1.2 材料与方法
• 1.2.1 主要实验仪器和试剂
• 1.2.2 实验标本
• 1.2.3 免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）染色
• 1.2.4 免疫组化结果判定
• 1.2.5 统计分析指标
• 1.2.6 统计学处理
• 1.3 实验结果
• 1.3.1 膀胱尿路上皮癌组织和正常膀胱组织CCR7蛋白的表达
• 1.3.2 膀胱尿路上皮癌组织CCR7蛋白表达与淋巴结转移的关系
• 1.3.3 膀胱尿路上皮癌组织CCR7蛋白与其它临床参数之间的关系
• 1.3.4 影响膀胱尿路上皮癌发生淋巴结转移的临床因素
• 1.4 讨论
• 1.4.1 CCR7蛋白在膀胱尿路上皮癌中异常表达
• 1.4.2 CCR7蛋白与膀胱尿路上皮癌淋巴结转移的关系
• 1.4.3 膀胱尿路上皮癌淋巴结转移的影响因素
• 1.4.4 研究CCR7表达的临床价值
• 1.5 结论
• 第二部分 CCL21/CCR7对T24细胞生物学行为的影响
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验试剂和仪器
• 2.2.2 T24细胞培养与传代
• 2.2.3 T24细胞Transwell小室迁移实验
• 2.2.4 T24细胞Transwell小室侵袭实验
• 2.2.5 噻唑蓝（MTT）法检测T24细胞增殖能力实验
• 2.2.6 流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）法检测T24细胞抗凋亡能力实验
• 2.2.7 蛋白免疫印迹（Western Bolt）法检测MMP-2、MMP-9、Bcl-2与Bax蛋白表达
• 2.2.8 统计学分析
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 CCL21/CCR7对T24细胞迁移能力和侵袭能力的影响
• 2.3.2 CCL21/CCR7对T24细胞MMP-2与MMP-9蛋白表达的影响
• 2.3.3 CCL21/CCR7对T24细胞增殖能力的影响
• 2.3.4 CCL21/CCR7对T24细胞抗凋亡能力的影响
• 2.3.5 CCL21/CCR7对T24细胞凋亡Bcl-2与Bax蛋白表达的影响
• 2.4 讨论
• 2.4.1 CCL21/CCR7对T24细胞迁移能力与侵袭能力的影响
• 2.4.2 CCL21/CCR7对T24增殖与抗凋亡能力的影响
• 2.5 结论
• 第三部分 CCR7与VEGF-C在膀胱尿路上皮癌表达的关系
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 试剂与仪器
• 3.2.2 实验标本
• 3.2.3 T24细胞培养与传代
• 3.2.4 免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）染色法检测组织CCR7蛋白与VEGF-C蛋白的表达
• 3.2.5 逆转录多聚酶链式反应（Reverse transcription-polymerase chainreaction,RT-PCR）法检测VEGF-C mRNA的表达
• 3.2.6 蛋白免疫印迹（Western Bolt）法检测VEGF-C蛋白及HuR蛋白的表达
• 3.2.7 统计学分析
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 CCR7蛋白与VEGF-C蛋白在膀胱癌组织中的表达
• 3.3.2 CCR7蛋白与VEGF-C蛋白在膀胱癌组织中的表达与淋巴结转移的关系
• 3.3.3 CCR7蛋白与VEGF-C蛋白表达的相关性
• 3.3.4 CCL21\CCR7对T24细胞VEGF-C mRNA表达的影响
• 3.3.5 CCL21\CCR7对T24细胞VEGF-C蛋白与HuR蛋白表达的影响
• 3.4 讨论
• 3.4.1 CCR7蛋白与VEGF-C蛋白在BUC中表达的相关性
• 3.4.2 CCL21/CCR7对T24细胞VEGF-C表达的影响
• 3.5 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果