蛋白质翻译后S-脂修饰质谱分析方法研究

论文摘要

蛋白质翻译后S-脂修饰主要指含16个碳原子的棕榈酸或其他长链脂肪酸与蛋白质半胱氨酸自由巯基的共价结合。与其他脂修饰相比,这种脂修饰具有可逆性,因而可调控,对细胞和组织内蛋白质的转运、膜锚定及酶的活性具有重要作用。由于蛋白质S-脂修饰多发生在膜蛋白和与膜相关的蛋白质中,而膜蛋白通常在细胞中丰度较低,因此本文主要针对低丰度S-脂修饰多肽的选择性富集,开展了以下几个方面的研究：（1） Fe3O4/Au磁性纳米复合材料的制备及表征。本文首先通过化学共沉淀法合成磁性Fe304纳米颗粒,再采用柠檬酸钠还原HAuCl4,在其表面包覆Au。实验证明,本法制得的Fe3O4/Au磁性纳米复合材料颗粒均匀,不仅具有较好的磁性,而且在水溶液中分散性好。（2）基于Fe3O4/Au磁性纳米复合材料的S-脂修饰多肽选择性富集及质谱分析方法研究。利用Au与含有游离巯基多肽的选择性结合,本文建立了S-脂修饰多肽的快速亲和富集方法,在外加磁场作用下实现目标物与复杂生物基质的分离,并与高灵敏MALDI-Q-TOF质谱分析方法结合,实现对S-脂修饰多肽的质谱鉴定。（3）纳米孔状结构多孔氧化铝膜的制备及表征。本文采用阳极氧化法制备了氧化铝膜,并研究了多孔膜的形成机理和反应条件。结果表明本法制得的氧化铝膜表面孔道分布高度有序,孔径均一,有望应用于进一步的生物样品分析中。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 蛋白质棕榈酰化修饰
• 1.2 酰基化基团的定性和定量分析
• 1.2.1 体内放射性标记分析酰基化基团
• 1.2.2 体外甲酯化和稳定同位素标记气相色谱-质谱分析脂肪酰化基团
• 1.2.3 体外氢化，乙基酯化和气相色谱-质谱分析酰基化基团
• 1.3 S-棕榈酰化蛋白质及棕榈酰化位点的检测
• 1.3.1 体外ABE方法检测棕榈酰化蛋白质
• 1.3.2 体内化学探针代谢标记及生物正交连接分析棕榈酰化蛋白质
• 1.3.3 基于FRAP的GFP标签标记分析棕榈酰化蛋白质
• 1.3.4 基于质谱分析棕榈酰化蛋白质及棕榈酰化位点
• 1.4 纳米材料在蛋白质分析方法研究中的应用
• 1.5 论文选题思想及主要内容
• 3O₄/Au纳米复合粒子的制备及表征'>第二章 磁性Fe₃O₄/Au纳米复合粒子的制备及表征
• 2.1 前言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 仪器与试剂
• 3O₄纳米粒子的合成'>2.2.2 磁性Fe₃O₄纳米粒子的合成
• 3O₄/Au磁性复合微粒'>2.2.3 硼氢化钠还原法合成Fe₃O₄/Au磁性复合微粒
• 3O₄/Au磁性复合微粒'>2.2.4 柠檬酸三钠还原法合成Fe₃O₄/Au磁性复合微粒
• 2.3 结果讨论
• 3O₄/Au磁性复合微粒原理'>2.3.1 种子生长法合成Fe₃O₄/Au磁性复合微粒原理
• 2.3.2 硼氢化钠还原法和柠檬酸三钠还原法
• 3O₄/Au纳米复合微粒合成的影响'>2.3.3 不同浓度HAuCl4对Fe₃O₄/Au纳米复合微粒合成的影响
• 3O₄/Au纳米复合微粒合成的影响'>2.3.4 温度对Fe₃O₄/Au纳米复合微粒合成的影响
• 3O₄/Au纳米复合微粒合成的影响'>2.3.5 溶液pH对Fe₃O₄/Au纳米复合微粒合成的影响
• 3O₄和Fe₃O₄/Au纳米复合微粒的形貌分析'>2.3.6 纳米Fe₃O₄和Fe₃O₄/Au纳米复合微粒的形貌分析
• 2.4 结论
• 第三章 S-脂化修饰多肽富集及分析方法研究
• 3.1 前言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 仪器与试剂
• 3.2.2 含巯基多肽的富集与样品制备
• 3.2.3 富集后多肽的MALDI-TOF-MS分析
• 3.3 结果与讨论
• 3O₄/Au纳米粒子对Adolase酶解液的富集'>3.3.1 Fe₃O₄/Au纳米粒子对Adolase酶解液的富集
• 3.3.2 吸附pH条件对富集效果的影响
• 3.3.3 乙腈对吸附效果的影响
• 3.3.4 洗涤条件对去除磷酸化多肽的影响
• 3.3.5 洗脱条件中DTT的影响
• 3.3.6 去除甲硫氨酸的影响
• 3.3.7 还原态游离巯基的封闭试验
• 3.4 结论
• 第四章 多孔阳极氧化铝膜的制备及表征
• 4.1 前言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 仪器与试剂
• 4.2.2 多孔阳极氧化铝膜的制备
• 4.2.3 多孔阳极氧化铝膜的形貌表征
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 多孔阳极氧化铝电解机理
• 4.3.2 多孔氧化铝的形貌分析
• 4.3.3 多孔阳极氧化铝电解条件分析
• 4.3.4 多孔氧化铝膜形成过程分析
• 4.4 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢