Foxp3在肺癌细胞中的作用及TLR4对其调控的研究

论文摘要

Foxp3是CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells, Tregs）特异的标志物及细胞发育和功能的关键调节基因。Tregs是一群具有免疫抑制功能的T细胞亚群,在肿瘤的免疫逃逸中发挥重要作用。近来研究发现Foxp3在胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤细胞内也有表达,但Foxp3在不同肿瘤细胞表达的作用不同,即使在同一种肿瘤也有结果相反的报道。目前尚未见有关Foxp3在肺癌细胞研究的报道,参与调控肺癌细胞Foxp3表达的调控机制也不明确。TLR4是Toll样受体家族（Toll like receptors, TLRs）成员之一,不仅在免疫细胞表达,在肿瘤细胞也有表达。肿瘤细胞TLR4信号通路活化后可通过大量炎性细胞因子的释放促进肿瘤的免疫逃逸。研究发现TLR4信号通路与Tregs关系密切,可诱导Tregs的活化,增强Tregs的增殖和抑制功能。基于上述研究背景,我们提出以下问题：肺癌细胞是否存在Foxp3表达?如果存在,其可能的作用是什么?其作用的相关机制和表达的调控机制又是什么?为探讨Foxp3在肺癌细胞中的作用、相关机制及其表达的调控,本课题从以下三方面进行了研究：1.首先通过研究Foxp3与TLR4在人非小细胞肺癌（NSCLC）组织肿瘤细胞中的表达及与临床病理指标的相关性,探讨Foxp3与TLR4在NSCLC发生发展中的作用及二者之间的联系。结果显示Foxp3和TLR4在NSCLC组织中高表达,Foxp3（?）勺表达与淋巴结转移和TNM分期密切相关,与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤的分化程度和组织学分型均无明显相关性；TLR4的表达与肿瘤的分化程度密切相关,与患者的年龄、肿瘤大小、组织学分型、淋巴结转移和TNM分期均无明显相关性；NSCLC组织中Foxp3与TLR4的表达显著正相关。结果表明肺癌细胞Foxp3和TLR4的表达与NSCLC的恶性生物学行为密切相关,二者之间可能存在某种内在联系,协同促进了NSCLC的发生发展。2.进一步研究Foxp3在小鼠NSCLC中Lewis肺腺癌（LLC）细胞系表达的作用。首先在基因和蛋白水平检测到LLC细胞表达Foxp3,然后构建pcDNA3.1-Foxp3重组质粒,通过将重组质粒瞬时转染LLC细胞研究Foxp3过表达对免疫功能和对化疗药物敏感性的影响。结果显示Foxp3过表达的LLC细胞及其培养上清均可显著抑制T淋巴细胞的增殖,明显诱导免疫抑制因子TGF-β1和IL-10的表达；Foxp3过表达的LLC细胞可明显降低对化疗药物阿霉素、丝裂霉素C的敏感性,并上调耐药基因mdrl的表达。结果表明LLC细胞Foxp3可能通过抑制机体的免疫功能和降低对化疗药物的敏感性促进肺癌的进展。3.LLC细胞TLR4调控Foxp3表达的研究。通过LPS活化和a（?）nti-TLR4/MD2抗体阻断TLR4信号通路研究TLR4对Foxp3表达的调控作用。结果显示LPS刺激LLC细胞后可明显上调Foxp3和TLR4的表达,阻断TLR4信号后抑制了Foxp3的表达上调。结果表明TLR4参与对LLC细胞Foxp3的表达调控,TLR4可能是Foxp3的上游信号分子。本研究意义在于初次探讨了肺癌细胞Foxp3在肺癌发生发展中的作用,相关机制以及TLR4对其表达的调控作用,为阐明肺癌细胞参与肿瘤侵袭转移的机制提供新的见解,也为临床肺癌的免疫治疗提供新的靶点。

论文目录

• 提要
• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩写词
• 引言
• 文献回顾
• 一、Foxp3的结构
• 二、Foxp3与Tregs
• 三、Foxp3与Toll样受体
• 四、Foxp3与肿瘤
• 课题设计思路
• 实验研究
• 第一部分 Foxp3和TLR4在人非小细胞肺癌组织的表达及临床意义
• 一、材料和方法
• 二、实验结果
• 三、讨论
• 四、结论
• 第二部分 Foxp3在小鼠Lewis肺癌细胞系表达的作用
• 一、材料和方法
• 二、实验结果
• 三、讨论
• 四、结论
• 第三部分 Lewis肺癌细胞TLR4调控Foxp3表达的研究
• 一、材料和方法
• 二、实验结果
• 三、讨论
• 四、结论
• 全文总结
• 参考文献
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果
• 致谢