论文摘要
目的①研究黄芩苷（Baicalin）对人白血病细胞株K562细胞增殖、凋亡的影响。②观察黄芩苷对K562细胞增殖、凋亡相关基因及蛋白表达的影响,探讨其作用机制。③黄芩苷作用后对K562细胞PI3K/Akt、MAPK/ERK信号转导通路中蛋白表达的变化。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法绘制细胞生长曲线、克隆形成实验检测黄芩苷对K562细胞增殖的影响;AO/EB荧光染色、DNA片段化分析、AnnexinⅤ/PI细胞凋亡检测及TdT酶介导的末端缺失原位标记（TUNEL）法检测黄芩苷对K562细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测黄芩苷作用前后K562细胞bcr/abl、c-myc、Bcl-2、Bax、h-tert基因mRNA表达的影响;蛋白印迹法（Western blotting）检测黄芩苷对K562细胞bcr/abl融合蛋白P210、磷酸化p210、c-myc、Bcl-2、procaspase-3、procaspase-9、PARP蛋白表达的影响及黄芩苷作用后K562细胞PI3K/Akt、MAPK/ERK信号通路蛋白表达水平的变化。结果细胞生长曲线、克隆形成实验结果显示黄芩苷能有效抑制K562细胞的增殖,作用48小时的IC50约为15μmol·L-1;AO/EB荧光染色、AnnexinⅤ/PI细胞凋亡检测、DNA片段化的检出及TdT酶介导的末端缺失原位标记（TUNEL）法证实黄芩苷能诱导K562细胞凋亡,随药物作用浓度的增加,凋亡率也渐上升。（2）黄芩苷下调K562细胞bcr/abl、c-myc、Bcl-2、h-tert、bcr/abl基因mRNA的表达;也下调了K562细胞c-myc、Bcl-2、P210、磷酸化p210（p- P210）蛋白的表达,上调Bax基因mRNA的表达。Western blotting的结果显示procaspase-3、procaspase-9、116KD的PARP蛋白表达水平下降,而PARP蛋白的85KD裂解活性片段逐渐升高,说明黄芩苷通过线粒体途径介导K562细胞凋亡;黄芩苷下调K562细胞Akt、MAPK信号通路蛋白Akt、p-Akt、IκB-α、p-IκB-α、p65、p-p65、mTOR、p-GSK-3β、MAPK（42/44）、p-MAPK（42/44）的表达,上调BAD蛋白的表达,而GSK-3β无明显变化。结论（1）黄芩苷能有效抑制K562细胞增殖,通过线粒体途径诱导其凋亡,在一定浓度范围内呈剂量效应关系。并可能通过下调bcr/abl、c-myc、Bcl-2、h-tert、mRNA和/或蛋白的表达,上调Bax基因mRNA的表达起作用。（2） PI3K/Akt、MAPK信号通路参与了黄芩苷抑制K562细胞增殖、诱导凋亡的过程。
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