DNA甲基化与三氧化二砷抗马立克氏病相关性的研究

论文摘要

鸡马立克氏病是严重危害养鸡业的一种传染性疾病，也是世界上第一个能用疫苗成功预防的肿瘤性疾病。但随着病毒的变异和强毒的出现，传统疫苗已不能起到很好的保护作用。为了有效防治马立克氏病，必须深入研究其发病机理。近年来有研究表明肿瘤的形成发展过程中癌基因和抑癌基因发生甲基化的改变，但是关于马立克氏病肿瘤甲基化发生机制国内外均无相关报道。本实验通过新银盐法探讨了目前广泛使用的一种抗癌药物——三氧化二砷在鸡体内的代谢动力学过程，同时采用高效液相色谱、甲基化特异性PCR、半定量RT-RCR方法检测了三氧化二砷使用前后鸡马立克氏病肿瘤基因组DNA甲基化水平的变化、抑癌基因p15甲基化的改变以及甲基化转移酶和抑癌基因p53 mRNA表达的变化，为研究三氧化二砷抗肿瘤机理的提供了新的途径，同时也加深了对马立克氏病发病机理的认识。研究结果如下：1鸡体内三氧化二砷的代谢动力学方程为：C血液=1.62916e-0.22733t+0.15327e-0.02024t－1.78243e-1.36943t，C肝脏=10.8896e-0.5307t+0.8389e-0.0676t－11.7285e-16.5388t，C肾脏=18.4888e-0.7156t+1.5501e-0.0536t－20.0388e-10.0238t，C胸肌=0.7300(e-0.0195t－e-6.6288t)，血液、肝脏、肾脏符合一级吸收二室开放模型，胸肌符合一级吸收一室开放模型。2肿瘤组织中DNA甲基化水平随着病情的发展而逐渐下降，使用三氧化二砷后肿瘤组织DNA甲基化水平逐渐升高。3正常肝肾组织中p15基因仅有一例发生甲基化（1／120），肿瘤组织中抑癌基因p15甲基化发生率很高（肝脏中为56.7％，肾脏为61.7％），通过三氧化二砷的诱导后p15甲基化发生率下降（肝脏为28.3％，肾脏为33.3％）。4在肿瘤组织中DNA甲基化转移酶的mRNA表达呈明显的上升趋势，抑癌基因p53的mRNA表达逐渐下降。三氧化二砷可以逆转DNA甲基化转移酶和p53的mRNA表达，使甲基化转移酶的mRNA表达呈下降趋势，而p53呈升高态势。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 DNA甲基化与肿瘤的研究进展
• 1.1.1 DNA甲基化
• 1.1.2 错配修复系统异常甲基化
• 1.1.3 肿瘤组织中DNA低甲基化
• 1.1.4 肿瘤组织中DNA高甲基化
• 1.1.5 DNA甲基化对肿瘤诊断及治疗的意义
• 1.2 鸡马立克氏病
• 1.2.1 马立克氏病毒（MDV）
• 1.2.2 发病机制
• 2O₃与DNA甲基化'>1.3 As₂O₃与DNA甲基化
• 1.4 研究目的与意义
• 2 材料与方法
• 2O₃在雏鸡体内的药物代谢动力学研究'>2.1 As₂O₃在雏鸡体内的药物代谢动力学研究
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要试剂及配制
• 2.1.3 动物分组及处理
• 2O₃的代谢动力学检测'>2.1.4 鸡体内砷含量及As₂O₃的代谢动力学检测
• 2O₃对DNA甲基化及mRNA表达的影响'>2.2 As₂O₃对DNA甲基化及mRNA表达的影响
• 2.2.1 主要仪器及试剂
• 2.2.2 马立克氏病动物模型的建立
• 2.2.3 临床症状观察
• 2.2.4 病理学检查
• 2.2.5 高效液相色谱测定基因组DNA甲基化水平
• 2.2.6 甲基化特异性PCR检测抑癌基因p15的甲基化状态
• 2.2.7 半定量RT-PCR检测甲基化转移酶及p53 mRNA的表达
• 2.3 试验数据的分析与统计
• 3 结果与分析
• 3.1 砷含量及药物代谢动力学检测结果
• 3.1.1 标准曲线的绘制
• 3.1.2 回收率的测定结果
• 3.1.3 砷含量的检测结果
• 2O₃的代谢动力学模型拟合及相关参数'>3.1.4 As₂O₃的代谢动力学模型拟合及相关参数
• 2O₃对DNA甲基化及mRNA表达影响的检测结果'>3.2 As₂O₃对DNA甲基化及mRNA表达影响的检测结果
• 3.2.1 临床症状观察结果
• 3.2.2 病理学检查结果
• 3.2.3 高效液相色谱测定基因组DNA甲基化水平的结果
• 2O₃对抑癌基因p15甲基化影响'>3.2.4 As₂O₃对抑癌基因p15甲基化影响
• 2O₃对甲基化转移酶及p53 mRNA表达影响的检测结果'>3.2.5 As₂O₃对甲基化转移酶及p53 mRNA表达影响的检测结果
• 4 讨论
• 2O₃在雏鸡体内的代谢动力学研究'>4.1 As₂O₃在雏鸡体内的代谢动力学研究
• 2O₃对MD基因组DNA甲基化水平的影响'>4.2 As₂O₃对MD基因组DNA甲基化水平的影响
• 2O₃对MD肿瘤组织中p15的甲基化影响'>4.3 As₂O₃对MD肿瘤组织中p15的甲基化影响
• 2O₃对甲基化转移酶及p53 mRNA表达水平的影响'>4.4 As₂O₃对甲基化转移酶及p53 mRNA表达水平的影响
• 2O₃对DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达水平的影响'>4.4.1 As₂O₃对DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达水平的影响
• 2O₃对p53 mRNA表达水平的影响'>4.4.2 As₂O₃对p53 mRNA表达水平的影响
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士期间发表的学术论文