骨髓间充质干细胞定向分化肝细胞并肝内移植及软肝煎应用对肝纤维化形成大鼠肝功能影响的研究

论文题目: 骨髓间充质干细胞定向分化肝细胞并肝内移植及软肝煎应用对肝纤维化形成大鼠肝功能影响的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 中西医结合临床

作者: 安伟德

导师: 胡祥

关键词: 骨髓间充质干细胞,肝细胞,诱导分化,肝细胞生长因子,表皮生长因子,溴脱氧尿苷,肝纤维化,移植,软肝煎

文献来源: 大连医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 再生医学是本世纪在生物医学史上重要工作之一。肝脏再生及干细胞的作用一直是大家研究的一个热点。目前干细胞移植研究多集中在胚胎干细胞、骨髓干细胞等,由于胚胎干细胞存在着伦理、法律、免疫排斥反应等问题,难以用于临床。自体骨髓来源肝细胞移植作为新的治疗肝衰竭病人方法已被人们所关注。最近研究表明,骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有多向分化潜能,包括向神经、血液、心肌、肝细胞等分化,这些引起了专家们对骨髓间充质干细胞可塑性的极大兴趣。骨髓来源肝细胞移植不仅解决自体肝细胞获取困难、增殖性差等问题,同时为肝脏再生组织工程研究提供了一个平台。为了探索骨髓间充质干细胞横向分化为肝细胞的作用机制,研究骨髓源性的肝细胞肝内移植定向分化,我们向肝纤维化形成大鼠肝脏内移植经诱导的骨髓间充质干细胞来源的肝细胞,观察其分布、分化情况,并观察联合应用中药软肝煎对肝纤维化形成大鼠肝脏功能改善的效果。一.首先我们从SD 大鼠的股骨中提取骨髓干细胞,利用Percoll 分离液密度梯度离心法结合贴壁法实现骨髓间充质干细胞的体外分离纯化、培养、传代扩增。取第3 代的骨髓间充质干细胞,应用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44、CD34、CD45、CD31、CD90,对骨髓间充质干细胞进行鉴定。流式细胞仪观查结果显示CD34、CD45、CD31 阴性,CD44、CD90 阳性。表明提取、分离、培养是非骨髓造血细胞的骨髓间充质干细胞。取第3 代的骨髓间充质干细胞以1×106/cm2的密度分别种植在六孔培养板中,并加入肝细胞生长因子(HGF)终浓度为20ng/ml 表皮生长因子(EGF)终浓度为1.5μg /ml,进行定向肝细胞诱导分化,诱导过程中用倒置相差显微镜观察细胞形态变化。对诱导产生的细胞,应用免疫荧光法进行肝细胞特异性标志CK8、CK18 和白蛋白检测。其中细胞检测出有CK8、CK18 和

论文目录:

一、论文

(一) 中文摘要

(二) 英文摘要

(三) 前言

(四) 第一部分:M S C s 分离、培养体外定向肝细胞诱导分化的研究

(五) 第二部分:肝纤维化形成模型的制备及移植前细胞的标记

(六) 第三部分:骨髓间充质干细胞及诱导后肝细胞在肝纤维化形成环境中分化比较

(七) 第四部分:骨髓间充质干细胞诱导的肝细胞大鼠肝纤维化形成环境中移植与软肝煎灌胃的比较

(八) 参考文献

二、文献综述

(一) 综述一

(二) 参考文献

(三) 综述二

(四) 参考文献

三、致谢

四、作者简介

五、英缩略语

发布时间: 2005-07-27

参考文献

[1].脐血干细胞移植体内诱导分化为肝细胞的实验研究[D]. 黄韬.四川大学2005
[2].成人骨髓干细胞向肝细胞诱导分化的实验研究[D]. 李秉璐.中国协和医科大学2005
[3].大鼠骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞的实验研究[D]. 何忠杰.第一军医大学2006

骨髓间充质干细胞定向分化肝细胞并肝内移植及软肝煎应用对肝纤维化形成大鼠肝功能影响的研究

猜你喜欢