论文摘要
呼吸道合胞病毒是引起婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体,对婴幼儿健康造成很大威胁。已研制的RSV疫苗在使用中常常会出现Th2型免疫极化现象和免疫病理损伤,本文将呼吸道合胞病毒F2蛋白与结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在大肠杆菌中融合表达,并与LT佐剂共同免疫,诱导机体产生Th1/Th2平衡免疫反应的同时,在呼吸道产生粘膜保护性抗体。本论文将呼吸道合胞病毒F2蛋白与结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的基因用PCR方法连接在一起,在大肠杆菌中经IPTG诱导后,ESAT-6-F2和ESAT-6蛋白均以包涵体形式高效表达,分子量分别为21kDa和10kDa,免疫印迹法证明表达的蛋白为ESAT-6-F2和ESAT-6,尿素变性后用镍离子亲和层析法进行纯化,纯度均达到90%以上。最后通过梯度透析复性成功复性于PBS缓冲液中。免疫共分5组,分别为：PBS组、LT组、ESAT-6组、ESAT-6-F2+LT组、ESAT-6-F2组,每组5只小鼠。实验结果显示,ESAT-6-F2+LT组、ESAT-6-F2组和ESAT-6组总IgG抗体效价比PBS高（P<0.05）,说明两个蛋白免疫原性较好,都倾向于Th2型免疫反应,而LT佐剂的加入削弱了ESAT-6-F2蛋白的免疫极化现象。同批免疫的小鼠末次免疫两周后开始攻毒,连续三天,剂量为每天每只小鼠攻毒5×105pfu,以未攻毒小鼠作为空白对照。结果表明,攻毒后小鼠体重均大幅下降,ESAT-6-F2+LT组小鼠减重明显少于PBS组,说明ESAT-6-F2蛋白与LT共同免疫,对小鼠产生一定的保护效果。抗体检测和肺部病理切片结果显示,ESAT-6组Th2型免疫极化现象加剧,肺部病变严重,而ESAT-6-F2+LT诱导较为平衡的免疫应答,肺部病变较轻,安全性较好。本论文初步评价了ESAT-6-F2蛋白的免疫原性,为呼吸道合胞病毒疫苗研制奠定基础。