血管内皮祖细胞移植应用于兔尿道缺损修复的实验研究

论文摘要

研究背景：先天畸形、外伤或肿瘤等疾病致使尿道损伤、狭窄或缺损，都需要进行尿道的修复、重建。尽管目前有300多种尿道修复的术式可供选择，但是术后尿瘘、尿道狭窄等并发症的发生率却依然居高不下。临床观察证实，这些并发症的出现几率与术后尿道的血供丰富与否成反比。目前大量的动物实验研究和临床资料均表明，血管内皮祖细胞（EPC）能帮助改善机体缺血部位和损伤部位的血供。血管内皮祖细胞（EPC）是血管内皮细胞的前体细胞，又称为成血管细胞或者血管母细胞（angioblast），是干细胞分化成熟过程中的一个细胞阶段。研究表明，在脐带静脉血、成体外周血和骨髓中的CD34+单个核细胞或CD133+单个核细胞离体培养均能分化为内皮样细胞，从而认定这些细胞即为原始的血管内皮祖细胞（EPC），进一步的研究发现人脐带血、外周血中的血管内皮祖细胞（EPC）均来自于骨髓。机体的损伤或缺血可以通过引起内源性VEGF的水平升高来动员骨髓中的血管内皮祖细胞（EPC）向靶组织归巢、分化，而且在向成熟血管内皮细胞（endothelial cell，EC）分化、参与靶组织的血管再生过程中对CD133的表达逐渐转弱甚至消失。国内外尚未见到有关血管内皮祖细胞（EPC）移植应用于尿道缺损修复方面的文献报道。研究目的：观察血管内皮祖细胞（EPC）在尿道缺损修复术后改善新尿道组织血液循环的效果。为减少和避免临床上尿道缺损修复术后尿瘘等并发症的出现以及提高一期尿道修复的成功率提供一个新的思路。研究方法：无菌取兔双下肢骨髓，应用密度梯度离心法分离并在体外培养其中单个核细胞层细胞，诱导其向血管内皮祖细胞（EPC）方向分化，将细胞传至第3代后备用。人为去除雄性兔尿道中段长约1cm，制作成兔尿道缺损模型。然后应用制备好的人脱细胞羊膜基质修复尿道缺损。同时，在实验组中，将诱导培养后的第3代细胞点状注射于修复后的尿道吻合口处及其外层的皮下组织中，对照组中应用等量的空白细胞培养液处理，术后按尿道下裂手术后常规护理。然后分别于术后4w、12w切取修复后的尿道组织，10％福尔马林固定，石蜡包埋切片后行HE染色，观察新尿道组织中血管再生情况，并随机计数100倍光镜下20个视野内毛细血管断面的数目，应用SPSS10.0统计学软件进行数据处理，比较实验组与对照组间的差异有无统计学意义。研究结果：1、兔骨髓源单个核细胞在体外呈贴壁生长，48h内即贴壁牢靠。前4d内生长较慢，近乎静止状态，4d后生长明显加速，呈现出克隆样生长；10d后细胞基本长满瓶底，表现出典型的铺路石样改变；经VEGF和bFGF在体外联合诱导培养后，细胞表现出条索状和草束状的排列方式。细胞免疫化学染色显示，目标细胞对CD133的表达水平下调，由具有CD34+／CD133+／CD31+表型的细胞群逐渐分化成具有CD34+／CD133-／CD31+表面特征的细胞群；2、术后4w、12w分别行尿道组织学观察，发现实验组中毛细血管数目明显多于对照组。4w时实验组和对照组的数据对比为：4.40±0.82和1.30±0.66，12w时的数据对比为：6.55±0.76和2.50±0.83。应用SPSS10.0统计学软件分别对两次数据行统计学处理，结果显示两次数据之间的差异均有统计学意义（P＜0.01）。研究结论：1、兔骨髓源单个核细胞在体外能诱导分化成血管内皮祖细胞（EPC）；2、血管内皮祖细胞（EPC）在改善尿道缺损修复术后新尿道血液循环方面效果明显。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分
• 血管内皮祖细胞移植应用于免尿道缺损修复的实验研究
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 问题与展望
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述部分
• 血管内皮祖细胞在尿道缺损修复中的应用前景
• 综述正文
• 参考文献
• 附录部分
• 缩略词说明
• 读研期间参与写作的论文
• 致谢