2-氨基-3-羟基吡啶-H2O2-HRP伏安酶联免疫新体系的研究及在免疫分析中的应用

论文摘要

伏安酶联免疫分析具备伏安法的高灵敏度及准确性,又以免疫反应弥补其在特异性上的不足,具有宽检测范围及低检测限,适合少量样品分析,仪器简单,操作方便。本工作将辣根过氧化物酶（HRP）催化过氧化氢（H2O2）氧化2-氨基-3-羟基吡啶（HAP）的酶促反应与其氧化产物的电极还原相偶合,利用伏安酶联免疫分析检测技术间接检测2-氨基-3-羟基吡啶-H2O2- HRP体系中的HRP含量。用此方法检测人血清甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）、血清总甲状腺素（T4）。全文共分为七章:2-氨基-3-羟基吡啶-H2O2-HRP伏安酶联免疫新体系在确定的最佳反应条件下,测定游离HRP检出限为1.2×10-13g/mL,线性范围为4.0×10-13～1.0×10-9 g/mL。利用此方法成功应用于检测人血清甲胎蛋白,灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为0.1～200 ng/mL,检测限为0.1 ng/mL。用所建立的方法对人血清样品进行了测定,并与现行的ELISA法进行对照,二者相关性很好。利用此方法成功应用于检测前列腺特异性抗原,灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为0.10～100.0 ng/mL,检测限为0.10 ng/mL。用所建立的方法对人血清样品进行了测定,并与现行的ELISA法进行对照,二者相关性很好。利用此方法成功应用于检测癌胚抗原,灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为0.10～80.0 ng/mL,检测限为0.10 ng/mL。用所建立的方法对人血清样品进行了测定,并与现行的ELISA法进行对照,二者相关性很好。利用此方法成功应用于检测总甲状腺素。灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为0.05～30.0μg/dL,检测限为0.05μg/dL。用所建立的方法对人血清样品进行了测定,并与现行的ELISA法进行对照,二者相关性很好。利用此方法成功应用于检测人绒毛膜促性腺激素,灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为1400.0 ng/mL,检测限为1 ng/mL。用所建立的方法对人血清样品进行了测定,并与现行的ELISA法进行对照,二者相关性很好。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1. 免疫分析概述
• 1.1 抗原和抗体的定义
• 1.2 抗原-抗体结合反应
• 1.3 抗原-抗体结合反应的原理
• 1.4 抗原-抗体结合反应的特点
• 1.5 影响抗原-抗体结合反应的因素
• 1.5.1 电解质
• 1.5.2 酸碱度
• 1.5.3 温度
• 2. 电化学免疫分析的方法及原理
• 2.1 电化学免疫分析方法分类
• 2.1.1 均相电化学免疫分析法
• 2.1.2 异相电化学免疫分析法
• 2.2 电化学分析测定方法
• 2.3 常用于电化学免疫分析的标记物
• 2.4 展望
• 3 酶联免疫分析
• 3.1 酶联免疫分析法的基本原理
• 3.2 常用于EIA 的酶
• 3.2.1 碱性磷酸酶
• 3.2.2 辣根过氧化物酶
• 3.3 展望
• 4 伏安酶联免疫分析法
• 5 课题意义及主要内容
• 2O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系的电化学研究'>第二章 2-氨基-3-羟基吡啶-H₂O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系的电化学研究
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 酶促反应方法
• 2.2.2 伏安法测定
• 3 结果与讨论
• 3.1 二阶导数线性扫描伏安法研究
• 3.1.1 二阶导数线性扫描伏安法曲线
• 3.1.2 酶促反应条件的选择
• 3.1.2.1 反应pH 的选择
• 3.1.2.2 反应缓冲溶液用量的选择
• 3.1.2.3 2-氨基-3-羟基吡啶用量的选择
• 2O₂ 用量的选择'>3.1.2.4 H₂O₂用量的选择
• 3.1.2.5 反应温度的选择
• 3.1.2.6 反应时间的选择
• 3.1.3 测定条件的选择
• 3.1.3.1 支持电解质的选择
• 3.1.3.2 支持电解质pH 的选择
• 3.1.3.3 支持电解质用量的选择
• 3.1.4 测定HRP 的工作曲线、精密度及检测限
• 3.1.5 HRP 标记物的测定
• 3.2 酶促反应产物的电极还原过程
• 3.2.1 酶促反应产物在汞电极上的吸附
• 3.2.1.1 静止时间
• 3.2.1.2 扫描速度
• 3.2.1.3 电毛细管曲线
• 3.2.2 循环伏安法
• 3.2.3 酶促反应产物的电极还原过程
• 4 小结
• 2O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定人血清甲胎蛋白'>第三章 2-氨基-3-羟基吡啶-H₂O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定人血清甲胎蛋白
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 线性范围及检测限
• 3.2 血清样品分析
• 4 小结
• 2O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定前列腺特异性抗原'>第四章 2-氨基-3-羟基吡啶-H₂O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定前列腺特异性抗原
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 线性范围，精密度及检测限
• 3.2 血清样品分析
• 4 小结
• 2O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定癌胚抗原'>第五章 2-氨基-3-羟基吡啶-H₂O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定癌胚抗原
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 线性范围，精密度及检测限
• 3.2 血清样品分析
• 4 小结
• 2O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定总甲状腺素'>第六章 2-氨基-3-羟基吡啶-H₂O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定总甲状腺素
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 线性范围，精密度及检测限
• 3.2 血清样品分析
• 4 小结
• 2O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定人绒毛膜促性腺激素'>第七章 2-氨基-3-羟基吡啶-H₂O₂-HRP 伏安酶联免疫分析新体系测定人绒毛膜促性腺激素
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 线性范围，精密度及检测限
• 3.2 血清样品分析
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表及待发表的学术论文目录