以减毒沙门菌为载体的H5亚型禽流感和SARS口服疫苗的研究

论文摘要

H5亚型禽流感和SARS两种人兽共患疫病严重的危及着社会经济的发展和人类的生命。疫苗是防治本病的重要手段,已有成功应用于人体的H5亚型禽流感疫苗和SARS疫苗,多采用注射接种方式,成本高,需专业人员操作,不易于免疫的普及。针对突如其来的重大疫情,使疫苗快速普及人群,口服是简捷方便的途径,开发口服疫苗势在必行。近年来以减毒沙门菌为载体的口服疫苗成为研究的热点,减毒伤寒沙门菌携带DNA疫苗进入人体的已有安全性报道,只要了解疾病的抗原特性,可以迅速的开发针对该病的口服疫苗,以它为载体还可以开发多价疫苗,生产周期短,成本低。减毒伤寒沙门菌作为疫苗载体菌显示了诱人的开发前景。本实验旨在应用减毒沙门菌为载体,构建H5亚型禽流感和SARS DNA口服疫苗。本实验应用PCR方法获得了AIV的HA基因,通过人工合成的方法获得了SARS多表位基因S合。对真核表达载体pVAX1进行改造,以asd基因替换pVAX1载体上的Kan+抗性基因,以EGFP为报告基因,成功转染真核细胞;构建了重组真核表达载体pASD,它与减毒沙门菌X4550构成载体-宿主平衡致死系统,解决了质粒载体应用于人体产生抗生素耐药性的问题。将HA基因和S合基因亚克隆于pVAX1和pASD,脂质体法转染293-T细胞,通过RT-PCR检测目的基因的转录,通过间接ELISA和间接免疫荧光法检测目的基因的表达,结果表明,HA基因和S合基因能够正确表达。将携带抗原基因的真核表达质粒电转化入沙门菌X4550,在动物体内、外的研究表明,质粒能够在细菌中稳定存在。细菌的生长曲线测定结果表明,质粒的存在并不影响细菌的生长状态。免疫小鼠确定安全剂量为≤1010CFU。口服疫苗免疫小鼠,结果表明,口服疫苗能够激发小鼠机体产生特异性体液免疫和细胞免疫反应。

论文目录

• 提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 口服疫苗传递系统及以减毒沙门菌为载体的口服疫苗的研究进展
• 1 口服疫苗的种类
• 2 口服疫苗运载体
• 3 以减毒沙门菌为载体的口服疫苗的研究进展
• 4 载体-宿主平衡致死系统在沙门菌中的应用
• 第二章 禽流感及人用禽流感疫苗的研究进展
• 1 禽流感病毒（AIV）概述
• 2 致病性分类
• 3 命名
• 4 分型
• 5 AIV基因组及其编码的蛋白质
• 6 AIV 复制的分子机制
• 7 禽流感病毒的致病力及其毒力的变异
• 8 禽流感病毒感染人类的机制
• 9 人禽流感的发生概况
• 10 国内外人用禽流感疫苗的研究进展
• 第三章 SARS及SARS疫苗的研究进展
• 1 SARS-CoV 的概述
• 2 SARS-CoV 的基因组特性
• 3 SARS-CoV 基因组编码的主要蛋白
• 4 SARS-CoV 的复制与增殖
• 5 SARS 疫苗的研究进展
• 6 未来疫苗的发展方向分析与展望
• 第二篇 研究内容
• 第一章 H5亚型禽流感病毒HA基因与SARS病毒S合基因的克隆及序列分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 减毒伤寒沙门菌平衡致死系统的构建
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 H5亚型禽流感病毒HA 基因和SARS 病毒S 合基因在293-T 细胞中的瞬时表
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 以减毒沙门菌为载体的 H5 亚型禽流感和 SARS 口服疫苗的构建
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的H5 亚型 AIV 和 SARS 口服疫苗免疫小鼠的实验研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的主要论文
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢
• 导师简介
• CURRICULUMVITAE
• 附表