P2X2/3受体在结状神经节细胞介导心肌痛伤害性信息传递的作用研究

论文摘要

目的探讨P2X3及P2X2/3受体在心肌及结状神经节（NG）神经元细胞介导心肌痛伤害性信息传递的作用。方法（1）心肌缺血大鼠行为学方法观察心肌缺血模型组、P2X3及P2X2/3受体拮抗剂A-317491干预的心肌缺血模型组和对照组三组大鼠的行为学变化;（2）HE染色、心电图记录、大鼠心肌酶水平测定、心肌的原位杂交及蛋白印迹等观察心肌缺血对大鼠心肌功能的影响;（3）免疫组化和蛋白印迹技术了解心肌缺血对心肌P2X3受体、大鼠结状神经节P2X2和P2X3受体蛋白表达的影响,RT-PCR和原位杂交的方法检测心肌P2X3受体、结状神经节P2X2和P2X3受体mRNA表达的变化。结果（1）心肌缺血大鼠出现明显的伤害性行为,应用A-317491后可明显减轻心肌缺血大鼠出现的伤害性反应。（2）心肌缺血对大鼠心肌的影响:①心肌的HE染色显示心肌缺血模型组心肌呈现大面积结缔组织增生现象和心肌细胞的萎缩,A-317491干预组的结缔组织增生现象和心肌细胞的萎缩现象明显减轻;②心电图记录显示,心肌缺血损伤的大鼠模型的心率（264.63±32.30）明显比对照组（361.38±29.08）慢（p<0.05）;心肌缺血损伤的大鼠模型的心电图ST段移位,出现高而尖的T波,应用A-317491后心肌缺血损伤大鼠的心率加快（从264.63±32.30到310.13±31.75）,而且A-317491还可以有效改善心肌缺血大鼠的早搏现象;③大鼠心肌酶水平测定结果显示,心肌缺血大鼠血清中CK（ 6663.967±230.793 ） ,CK-MB （ 3091.553±370.2849 ）和LDH（2469.4±147.5876）水平比对照组CK（742±41.1038,p<0.01）, CK-MB（717.7067±89.3825, p<0.01）和LDH（289.6667±16.4279, p<0.01）显著升高;A-317491可以减低心肌缺血大鼠血清中CK（2960.567±55.906, p<0.05）, CK-MB（1364.823±121.6325,p<0.05）和LDH（907.0333±47.2300, p<0.05）的水平。④心肌的原位杂交显示心肌缺血组心肌P2X3受体阳性细胞灰度值（147.75±5.67）较对照组（114.75±2.12）灰度值增大（p<0.01）,A-317491干预后的心肌缺血大鼠组心肌P2X3受体阳性细胞灰度值（119.86±4.82）较心肌缺血组减小（p<0.01）。⑤心肌的蛋白印迹结果显示心肌缺血组心肌P2X3受体蛋白表达（138.66±3.47）较对照组（101.38±5.62）灰度值增大（p<0.01）,A-317491干预后的心肌缺血大鼠组心肌P2X3受体蛋白表达（112.35±2.65）较心肌缺血组减小（p<0.01）。（3）心肌缺血大鼠结状神经节P2X2及P2X3受体变化:①免疫组化结果显示心肌缺血组NG神经元P2X2受体阳性细胞灰度值（113.77±5.58）较对照组（108.25±8.83）增大（p<0.05）,A-317491干预的心肌缺血组P2X2受体阳性细胞灰度值（104.26±6.34）较心肌缺血组减小（p<0.05）;心肌缺血组NG神经元P2X3受体阳性细胞灰度值（134.39±9.03）较对照组（118.51±8.00）增大（p<0.05）,A-317491干预的心肌缺血组P2X3受体阳性细胞灰度值（121.29±8.73）较心肌缺血组减小（p<0.05）。②原位杂交结果显示心肌缺血组NG神经元P2X2受体mRNA表达（153.83±9.04）较对照组（137.35±7.48）增大（p<0.05）,A-317491干预的心肌缺血组P2X2受体mRNA表达（143.49±9.85）较心肌缺血组减小（p<0.05）;心肌缺血组NG神经元P2X3受体mRNA表达（138.07±3.57）较对照组（123.31±9.02）增大（p<0.05）,A-317491干预的心肌缺血组P2X2受体mRNA表达（127.55±4.73）较心肌缺血组减小（P<0.05）。③目的条带经β-actin标化后的RT-PCR结果显示心肌缺血组P2X2的mRNA表达（1.407±0.09）较对照组（1.131±0.04）增大（p<0.01）,A-317491干预的心肌缺血组的表达（1.136±0.05）较心肌缺血组减小（p<0.01）;心肌缺血组P2X3的mRNA表达（0.847±0.05）较对照组（0.583±0.02）增大（p<0.01）,A-317491干预的心肌缺血组的mRNA表达（0.666±0.04）较心肌缺血组减小（p<0.01）。④蛋白印迹结果显示心肌缺血组P2X2蛋白表达（2.13±0.09）较对照组（0.819±0.03）增大（p<0.05）,A-317491干预的心肌缺血组的表达（1.48±0.05）较心肌缺血组减小（p<0.05）;心肌缺血组P2X3蛋白表达（2.15±0.06）较对照组（0.90±0.04）增大（p<0.01）;A-317491干预的心肌缺血组的表达（0.93±0.05）较心肌缺血组减小（p<0.01）。结论心肌缺血导致结状神经节神经元P2X2/3受体表达增加和心肌细胞P2X3受体表达增加,P2X3和P2X2/3受体特异性拮抗剂A-317491可以降低心肌缺血大鼠结状神经节神经元P2X2/3受体的表达和心肌P2X3受体的表达。结状神经节神经元P2X2/3受体及心肌P2X3受体参与心肌痛伤害性感受信息的传递。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 动物
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 溶液配制
• 2.2 方法
• 2.2.1 实验动物的分组和模型的制备
• 2.2.2 心肌缺血大鼠行为学
• 2.2.3 心肌缺血大鼠心肌变化
• 2.2.4 心肌缺血大鼠结状神经节变化
• 2.2.5 统计方法
• 第3章 结果
• 3.1 心肌缺血大鼠行为学变化
• 3.2 心肌缺血大鼠心肌变化
• 3.2.1 心肌HE 染色
• 3.2.2 心电图的测定结果
• 3.2.3 心肌酶的测定
• 3.2.4 心肌原位杂交
• 3.2.5 心肌组织蛋白印迹
• 3.3 心肌缺血大鼠结状神经节变化
• 2和P2X₃ 受体）'>3.3.1 免疫组织化学（P2X₂和P2X₃受体）
• 2和P2X₃ 受体）'>3.3.2 原位杂交（P2X₂和P2X₃受体）
• 2和P2X₃ 受体）'>3.3.3 RT-PCR 结果（P2X₂和P2X₃受体）
• 2和P2X₃ 受体）'>3.3.4 蛋白印迹结果（P2X₂和P2X₃受体）
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果