论文题目: 繁茂膜海绵放线菌活性筛选、诱导的研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 生物化工
作者: 郭鹏飞
导师: 虞星炬,靳艳
关键词: 繁茂膜海绵,放线菌,生物活性,共培养,诱导,多样性
文献来源: 中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）
发表年度: 2005
论文摘要: 海绵体内聚集了大量的种类不同的海洋微生物，多种研究表明，海绵微生物是海绵活性物质生物合成的参与者和直接合成者。论文以繁茂膜海绵相关微生物为研究对象，开展了可培养放线菌的筛选、活性代谢产物分离提取、微生物共培养诱导及海绵胞内菌的多样性等方面的研究。 以繁茂膜海绵中分离的多种放线菌株为材料，采用常规的抗菌、抗肿瘤活性模型对菌株的活性进行了筛选。以菌株稳定性、活性物质稳定性和极性为主要标准，对具有初步活性的相关菌株进行了考察，获得一株目标菌株Hp-109。 对Hp-109产生活性物质的发酵条件进行了优化。在优化发酵条件下获得的Hp-109发酵液，通过萃取、硅胶柱、Sephadex柱PHPLC的组合，分离获得较高纯度的活性物质S。S经结构检测初步显示为两种同系物组成的混合物，Antibase数据库搜索表明两种同系物均可能是新化合物，最终鉴定正在进行中。 参考海绵相关微生物在海绵组织中共生的微生态环境，对海绵微生物共培养诱导活性物质的新思想、新技术作了初步的探索，结果表明共培养诱导能够产生不同于单培养时产生的代谢产物。同时对抗菌活性筛选的培养基进行了考察，得到了优化的培养基SM和M2。 采用细胞分离的方法对海绵细胞胞内微生物的生物多样性进行了研究，结果显示在海绵胞内生存着不同类群的未可培养微生物群体，同时发现海绵胞内存在与降解有机污染物相关的菌株，为筛选以污染物降解为靶向的海绵微生物提供了依据。
论文目录:
摘要
Abstract
第一章 海绵相关微生物及其天然产物(文献综述)
1.1 海绵和海绵相关微生物
1.1.1 海绵天然产物的研究
1.1.2 海绵活性物质的微生物来源
1.2 海绵相关微生物研究现状
1.2.1 海绵相关微生物来源的活性物质研究
1.2.2 海绵微生物多样性的研究
1.3 微生物活性天然产物的研究方法
1.3.1 样品采集和微生物的分离纯化
1.3.2 微生物的筛选
1.3.3 微生物发酵
1.3.4 微生物代谢产物分离纯化
1.3.5 微生物活性天然产物结构分析
1.4 微生物多样性的研究方法
1.4.1 克隆基因文库分析法
1.4.2 荧光原位杂交技术
1.4.3 RFLP技术
1.4.4 DGGE技术
1.5 本课题的研究背景和计划
参考文献
第二章 海绵放线菌活性菌株筛选及活性物质分离提取
2.1 引言
2.2 实验材料及仪器
2.2.1 实验材料
2.2.2 仪器
2.3 实验方法
2.3.1 杯碟法测抗菌活性
2.3.2 抗肿瘤活性测定(MTT法)
2.3.3 海绵放线菌抗菌、抗肿瘤活性筛选
2.3.4 各活性菌株发酵培养的基础培养基
2.3.5 活性菌株的稳定性考察
2.3.6 生物活性物质稳定性和极性考察
2.3.7 Hp-109发酵条件优化
2.3.7.1 氮源优化
2.3.7.2 正交设计优化各发酵条件
2.3.8 Hp-109发酵液的制备
2.3.9 发酵液和菌体的萃取、浓缩
2.3.10 分离纯化过程中抗菌活性测定和薄层层析分析
2.4 结果与讨论
2.4.1 抗菌、抗肿瘤活性菌株的筛选
2.4.2 发酵基础培养基的确定
2.4.3 活性菌株的稳定性考察
2.4.3.1 不同批次菌株的活性稳定性
2.4.3.2 不同代菌株的活性稳定性
2.4.4 生物活性物质的稳定性与极性
2.4.4.1 生物活性物质的热稳定性
2.4.4.2 生物活性物质的极性
2.4.5 菌株筛选及稳定性考察讨论
2.4.6 Hp-109发酵条件优化
2.4.6.1 Hp-109氮源优化
2.4.6.2 活性物质产生的最佳培养条件
2.4.7 Hp-109批量发酵及活性物质提取
2.4.8 活性物质的分离纯化
2.4.8.1 分离基本过程
2.4.8.2 分离具体过程
2.4.9 活性物质结构的初步分析
2.5 小结
参考文献
第三章 海绵放线菌活性诱导的研究
3.1 引言
3.2 实验材料及仪器
3.3 实验方法
3.3.1 培养基优化诱导活性物质
3.3.2 共培养诱导活性物质
3.4 结果与讨论
3.4.1 培养基筛选
3.4.1.1 抗枯草芽胞杆菌活性物质的培养基筛选
3.4.1.2 抗白假丝酵母菌活性物质的培养基筛选
3.4.1.3 抗黑曲霉菌活性物质的培养基筛选
3.4.1.4 抗菌培养基筛选讨论
3.4.2 共培养研究
3.4.2.1 菌株初步鉴定结果
3.4.2.2 测试菌株在单培养和共培养模式下的抗菌活性
3.4.2.3 代谢产物谱
3.4.2.4 活性成分的确定
3.4.2.5 共培养讨论
3.5 小结
参考文献
第四章 繁茂膜海绵胞内细菌多样性研究
4.1 引言
4.2 仪器及实验材料
4.2.1 样品采集
5.2.2 试剂与溶液
4.2.3 仪器
4.3 实验方法
4.3.1 海绵细胞分离
4.3.1.1 海绵细胞分离流程
4.3.1.2 前处理
4.3.1.3 离散制备全细胞
4.3.1.4 Ficoll密度梯度离心分离细胞
4.3.2 海绵胞内菌基因组DNA提取
4.3.3 16S rDNA目的片断PCR扩增、PCR产物纯化
4.3.4 TA Clone
4.3.5 PCR技术和双酶切筛选有效的阳性克隆
4.3.6 有效的阳性克隆插入片断测序
4.3.7 16S rDNA的系统发育树分析
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 海绵细胞分离和形态观察
4.4.2 胞内菌基因组DNA提取、PCR扩增、TA克隆及筛选
4.4.3 有效序列测序及系统发育树分析
4.5 小结
参考文献
第五章 总结论
附录
作者简介及发表文章目录
致谢
发布时间: 2007-03-13
参考文献
- [1].繁茂膜海绵相关微生物的多样性研究[D]. 徐君怡.中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）2004
- [2].我国南海丰肉结海绵相关微生物多样性及其生物活性研究[D]. 李长清.中国协和医科大学2009
- [3].澳大利亚厚皮海绵天然产物的研究[D]. 李斌.中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）2004
- [4].夏威夷入侵型海绵Mycale armata的微生物结构分析[D]. 亓芳.山东农业大学2007
- [5].澳大利亚厚皮海绵共附生链霉菌DA22活性物质的研究[D]. 黄小力.上海交通大学2009
- [6].海绵共附生粪产碱杆菌活性代谢产物的研究[D]. 沈颖.上海交通大学2007
- [7].中国南海海绵Holoxea sp.原核共生体的种属多样性与空间分布[D]. 刘放.上海交通大学2010
- [8].两株海绵内生真菌次生代谢产物分离及活性研究[D]. 孙传英.福建农林大学2011
- [9].中国南海海绵可培养共生真菌种群多样性、抑菌活性的研究及PKS,NRPS功能基因的筛选[D]. 周康.上海交通大学2011
- [10].厚皮海绵化学成分与双齿围沙蚕糖苷酶的研究[D]. 宋淑梅.大连海洋大学2016
相关论文
- [1].海绵放线菌抑菌活性菌株的筛选及HVG 29菌株代谢产物的分离与结构鉴定[D]. 李巧连.辽宁师范大学2010
- [2].我国南海丰肉结海绵相关微生物多样性及其生物活性研究[D]. 李长清.中国协和医科大学2009
- [3].抗MRSA海绵共生放线菌的分离及菌株HA01041、HA01184的分类鉴定、发酵优化[D]. 刘玲枝.华南热带农业大学2007
- [4].海绵共附生活性菌PKS和NRPS基因的筛选及多样性研究[D]. 张薇.上海交通大学2008
- [5].海洋微生物的拮抗菌筛选及一株抗酵母放线菌YT研究[D]. 桂林.安徽农业大学2007
- [6].一株抗菌海洋放线菌的分离鉴定及其活性成分的初步研究[D]. 原居林.西北农林科技大学2008
- [7].海绵及其放线菌天然产物提取、活性诱导研究[D]. 张浩.中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）2006
- [8].基于宏基因组的海绵及其共附生微生物功能基因（簇）研究[D]. 张戌升.上海交通大学2007
- [9].繁茂膜海绵相关微生物的多样性研究[D]. 徐君怡.中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）2004
- [10].海洋细菌抗真菌活性物质的筛选[D]. 肖春.华南热带农业大学2003