微管骨架在登革病毒感染中作用的初步研究

论文摘要

登革病毒（dengue viruses, DV）是黄病毒属（Flavivirus）的单股正链RNA 病毒,广泛流行于热带和亚热带地区,主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起人类登革热（classical dengue fever, DF）和登革出血热/登革休克综合征（dengue haemorrhagic fever /dengue shock syndrome, DHF/DSS）。近年来,在世界范围内和我国南方及东南亚,DHF/DSS 的发病率有明显增加之趋势,可见登革病毒感染已是严重的公共卫生问题。登革病毒完整的感染周期分3 个步骤:进入宿主细胞、生物合成及组装释放。近年来的大量研究认为微管骨架在病毒和病毒蛋白从细胞周边向细胞核方向的逆行性运输以及从细胞中心向细胞周边区域的顺行性运输的转运过程中起着重要的作用,因而推测,登革病毒可能也利用现成的微管骨架,以完成其在细胞内的移行。微管研究中最常用的药物有2 类:一类阻止微管蛋白的添加,从而阻断微管的组装,并引起原有微管的解聚,如秋水酰胺,长春花碱,诺考哒唑等;另一类为稳定微管的药物,如紫杉醇,紫杉酚。本研究以脐静脉来源的ECV304 细胞和人肝癌细胞株HepG2 细胞为研究对象,探讨了登革病毒在与宿主细胞相互作用过程中微管的变化,同时选用了秋水酰胺（demecocline）,诺考哒唑（nocodazole） 和紫杉醇（paclitaxel）等药物,在病毒复制的不同环节干扰感染实验,期望从不同的角度分析微管骨架在登革病毒复制过程中的作用。本研究的主要结果和结论如下: 1. 登革病毒在ECV304 细胞中的增殖规律以MOI=1 感染ECV304 细胞,感染后72 h 达高峰,滴度约为106PFU/ml,随之出现渐降趋势。为明确病毒释放的时段,我们对感染后12 h 内培养上清的病毒滴度,进行了分时段检测,结果表明感染后4-5 h 培养细胞上清即可检测到病毒,在0、2、5、8 h,病毒滴度分别为1.1×103PFU/ml、1.2×103PFU/ml、4.25×103PFU/ml、1.05×104 PFU/ml,因而我们认为感染后5-8 h 可能是登革病毒从ECV304 细胞释放的关键时段。2.登革病毒感染引起微管骨架排列变化,登革病毒抗原与微管共染正常情况下,微管由核向外呈辐射状分布,核周的微管组织中心（microtubule organizing center, MTOC）呈星形,位于胞核一侧, 荧光强度较强。本实验发现感染后24 h,微管平均荧光强度减弱,排列紊乱,主要表现为（1）辐射状分布的微管变成无

论文目录

• 英文缩写一览表
• 英文摘要
• 中文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 全文小结
• 致谢
• 照片
• 参考文献
• 文献综述 微管骨架与病毒感染
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文