论文摘要
目的:观察糖基化人血清白蛋白（Advanced glycated human serum albumin, AGE-HSA）刺激对脂肪来源干细胞（Adipose tissue-derived stem cells, ADSCs）氧化应激、增殖、迁移以及分泌细胞因子的影响,同时对糖基化终产物受体（receptor for Receptor for Advanced Glycation Endproducts, RAGE）-丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-Activated Protein Kinase, MAPK）-核因子-κB （nuclear factor-κB, NF-κB）通路以及节律基因参与相应功能紊乱的分子作用机制进行研究。方法:取美容患者皮下脂肪组织,经体外酶消离心分离细胞,通过流式细胞和诱导定向分化后免疫组化染色鉴定为人脂肪来源干细胞。给予不同浓度的AGE-HSA刺激,采用Western-blot观察RAGE、MAPK及NF-κB通路的蛋白表达变化情况。给予ERK和p38抑制剂阻断相关信号通路,采用荧光定量逆转录多聚酶链反应检测RAGE和节律基因Rev-erbα、Bmal1和Per2在上述处理后不同时间点的mRNA表达情况;oxyblot和荧光显微镜观察细胞内氧化应激的变化;流式细胞仪和CCK8试剂盒检测对细胞增殖的影响;transwell小室和刮痕实验检测对细胞迁移功能的影响;ELISA检测细胞因子分泌的变化。采用siRNA转染ADSCs抑制节律基因关键分子Rev-erbα的表达,研究Rev-erbα在AGE-HSA诱导的病理过程中的作用。结果:AGE-HSA刺激可显著抑制ADSCs迁移,但可促进细胞增殖和分泌细胞因子,同时伴有胞内氧化应激反应程度升高和RAGE-MAPK-NF-κB信号通路激活,而ERK和p38抑制剂以及瑞舒伐他汀可不同程度地抑制AGE-HSA的病理作用;AGE-HSA的病理作用伴有节律基因Rev-erbα、Bmal1和Per2的表达异常,而经siRNA转染抑制细胞Rev-erbα的表达则可拮抗AGE-HSA诱导的ADSCs迁移功能障碍。结论:AGE-HSA可能通过激活RAGE-MAPK-NF-κB通路,诱发胞内氧化应激和随后的节律关键基因Rev-erbα表达升高,导致节律系统异常,参与ADSCs的功能紊乱;而细胞在急性AGE-HSA刺激后的增殖和分泌功能的增强可能是其主动调节对抗负性刺激的自我保护机制,这些发现部分揭示了节律基因Rev-erbα参与AGE-HSA诱导ADSCs功能紊乱的新机制。
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