蟹类热休克蛋白70基因cDNA的克隆及热激前后组织表达量的初步研究

论文摘要

热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）是热休克蛋白家族中最重要的一类成员,具有“分子伴侣”、细胞保护、抗凋亡以及肿瘤免疫治疗等独特复杂的生物学功能,因此,它的研究已成为生命科学领域研究的热点之一。根据蓝蟹（Callinectes sapidus）HSC70基因以及凡纳宾对虾（Litopenaeus vannamei）HSP70基因的cDNA全长序列,设计引物,采用RT-PCR和RACE（rapid amplification ofcDNA ends）相结合的方法,从38℃热休克的中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）的卵组织中克隆得到长2429bp的热休克蛋白70基因,编码649个氨基酸的多肽分子,推测的分子量为70.9kDa,理论等电点为5.3。与已知的30个其它生物的HSP70或HSC70蛋白序列的同源性为66～91%,通过构建系统发生树,发现该热休克蛋白70基因是一种组成型HSC70基因。相同方式,在38℃热休克的锯缘青蟹（Scylla serrata）的卵组织中克隆得到长2482bp的热休克蛋白70基因,编码649个氨基酸的多肽分子,分子量为71.06kDa,理论等电点为5.24。包括长1950bp的完整编码区,在poly（A）尾上游发现一加尾信号（AATAAA）。与已知的30个其它生物的HSP70和HSC70蛋白序列构建系统发生树,发现该热休克蛋白70基因也是一种组成型HSC70基因。采用半定量RT-PCR方法,对两种蟹的HSC70组织表达进行研究。中华绒螯蟹的HSC70的mRNA常温常态下在卵组织、心脏、肌肉、胃、肠组织中都有一定的表达量,经过38℃热休克以后,表达量也相应升高,部分组织表达量增加比较显著,则进一步说明该HSC70是一种组成型的热休克蛋白,其中卵组织和心脏的表达量最高。在1-4h的热应激实验中,各测试组织的表达量都呈上升趋势。锯缘青蟹的HSC70的mRNA表达情况和中华绒螯蟹相似,正常情况下在卵组织、心脏、肌肉、胃、肠组织中都有一定的表达量,经过38℃热休克以后表达量也有相应的提升,说明该HSC70也是一种组成型的热休克蛋白。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 绪论
• 1.1 热休克蛋白
• 1.1.1 热休克蛋白的研究历史
• 1.1.2 热休克蛋白的分类
• 1.1.3 热休克蛋白的诱导机理
• 1.1.4 热休克蛋白的功能
• 1.1.5 热休克蛋白的主要分子生物学特性
• 1.1.6 热休克蛋白的基因调控
• 1.1.7 热休克蛋白70的分子结构
• 1.2 水生生物热休克蛋白的研究
• 1.2.1 温度
• 1.2.2 环境污染
• 1.2.3 其他因子
• 第二章 中华绒螯蟹的HSP70基因全长的克隆
• 2.1 中华绒螯蟹热休克蛋白70基因cDNA全长序列的克隆
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.1.3 结果与分析
• 2.2 锯缘青蟹热休克蛋白70基因cDNA全长序列的克隆
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.2.3 结果与分析
• 2.3 讨论
• 2.3.1 RACE技术
• 2.3.2 RNA提取及RT-PCR
• 2.3.3 中华绒螯蟹和锯缘青蟹的HSC70基因
• 第三章 中华绒螯蟹和锯缘青蟹热休克蛋白70基因在不同组织的相对表达量
• 3.1 半定量条件的优化
• 3.2 组织表达实验
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 半定量条件的优化
• 3.3.2 中华绒螯蟹HSC70基因在不同组织的相对表达量
• 3.3.3 锯缘青蟹HSP70基因在不同组织的相对表达量
• 3.4 讨论
• 第四章 展望
• 参考文献
• 研究生期间发表论文情况
• 致谢