犬细小病毒的分离鉴定及其蛋白基因的序列分析研究

论文摘要

本研究进行了犬细小病毒（CPV）的分离鉴定及其VP2蛋白基因的序列分析研究。用F81细胞从2008-2010年间不同地区送检的30份肠炎犬病料中分离出11株细小病毒,经形态学、理化学、生物学和分子病毒学等鉴定。结果这11株病毒均能在F81细胞上生长,产生典型的CPV细胞病变；,抗氯仿,耐酸,耐热,能被5-IUDR抑制,为DNA病毒,可凝集猪、马、猫的红细胞,不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞,HA试验能被抗CPV的特异性抗体所抑制。鉴定结果证明这10株病毒均为细小病毒。根据Genbank上发表的CPV与FPV基因序列,利用DNAstar软件分别设计扩增CPV VP2基因。扩增CPV VP2基因的引物,上游引物：5’-C ATGAGTGATGGAGCAGTTCAACCAGAC-3’下游引物：5’-CTAGGTGCTAGTTGATATGTAATAAAC-3’。CPV VP2采用分子克隆技术对对所分离的11株CPV VP2蛋白基因进行了序列分析。根据CPV VP2蛋白10个关键位点氨基酸的突变情况,结果CPV08-011、CPV09-02为CPV-2a；CPV09-04和CPV10-05与CPV-2a的关系最为密切,但是其VP2第898位核苷酸发生G-→A替换使其第300位氨基酸发生G→S替换（300G-）S)。CPV08-022、CPV09-01、CPV09-03、CPV10-01、CPV10-02、CPV10-03、CPV10-04为CPV-2b。不同毒株的VP2蛋白还发生其他的氨基酸替换,CPV09-04和CPV10-05的核苷酸发生700C-→T替换使氨基酸发生234H→Y替换；CPV10-03的核苷酸发生767G-→A替换,氨基酸发生256R--→K替换；CPV09-03、CPV09-04、CPV10-01、CPV10-02的核苷酸发生800T→A替换,氨基酸发生267F→Y替换。CPV08-011、CPV09-02的核苷酸发生889T-→G替换,氨基酸发生297S-→A替换。所分离的CPV毒株与参考毒株的核酸总体同源性在98%以上,CPV不同突变株的出现顺序及进化方式与文献报道一致,没有形成明显的CPV中国支。该研究丰富了我国CPV的流行病学资料,为更为有效的防制CPV提供了实验数据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 文献综述犬细小病毒的研究进展
• 1 CPV形态、基因组、复制以及装配特征
• 2 CPV的理化性质、致病性
• 3 CPV的起源及进化
• 4 CPV疫苗的研究现状
• 犬细小病毒分离和鉴定
• 1. 方法与材料
• 1.1 病毒分离
• 1.2 常规病毒学鉴定
• 2 结果
• 2.1 病毒分离
• 2.2 常规病毒学鉴定结果
• 3 讨论
• 3.1 病毒分离
• 3.2 CPV分型
• 3.3 非同义替代
• 3.4 进化方式
• 结论
• 参考文献
• CPV18-011
• 致谢