LY-EC诱导肝细胞毒性的体外试验研究

LY-EC诱导肝细胞毒性的体外试验研究

论文摘要

目的:在体外试验系统,探讨浏阳霉素乳剂(Liuyangmycin emulsifiable concentrate,LY-EC)对L-02肝细胞抗氧化系统及线粒体能量代谢的影响,为进一步研究浏阳霉素肝损害的毒性机制奠定实验基础。方法:用L-02肝细胞为受试细胞,通过MTT试验检测LY-EC对L-02肝细胞存活率的影响,在>60%细胞存活率的浓度下设置6个试验组即100mg/L、25mg/L、6.25mg/L、1.56mg/L、0.39mg/L LY-EC处理组和1个对照组,LY-EC处理细胞时间为12h。用化学比色法测定谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、肝细胞线粒体琥珀酸脱氢(SDH)、细胞膜ATP酶、谷胱甘肽—S转移酶(GST)活性和线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放度;用高效液相色谱法检测不同浓度LY-EC对肝细胞中腺苷酸(ATP,ADP,AMP)含量的影响,并分析ATP/ADP比值以及负荷能量(EC)的变化;电镜观察高、中浓度LY-EC对线粒体超微结构的影响。结果:在100mg/L-0.39mg/L处理浓度范围,LY-EC对L-02肝细胞具有明显细胞毒性,其细胞存活指数与LY-EC处理浓度呈负明显相关(r=-0.939)。LY-EC处理的肝细胞与对照组比较,其细胞SOD、SDH、ATP酶与GST活性显著降低(P<0.05),线粒体PTP开放度与MDA含量明显增加(P<0.05),并观察到明显的浓度-效应关系。染毒组肝细胞内GSH、总腺苷酸含量(TAN)、ATP/ADP比值与对照组比较显著降低(P<0.05),LY-EC处理组Ec值与对照组比较明显增加(P<0.05),但均未观察到明显的浓度-效应关系。电镜观察发现LY-EC高、中浓度染毒组肝细胞胞浆水肿,线粒体肿胀变形,嵴不完整甚至消失,内质网扩张,严重者出现空泡样变,周围积聚大量的溶酶体,发生膜破裂。结论:LY-EC对L-02肝细胞存在氧化损伤作用;对L-02肝细胞线粒体能量代谢存在抑制作用。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一章 前言
  • 第二章 材料与方法
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 受试物
  • 2.1.2 受试细胞
  • 2.1.3 主要试剂
  • 2.1.4 主要仪器
  • 2.1.5 试验溶液配制
  • 2.2 方法
  • 2.2.1 肝细胞培养
  • 2.2.2 肝细胞生存率测定(MTT法)
  • 2.2.3 细胞内MDA、GSH、SOD的测定(化学比色法)
  • 2.2.4 肝细胞线粒体膜通透性检测
  • 2.2.5 肝细胞内ATP,ADP,AMP含量的测定
  • 2.2.6 肝细胞内琥珀酸脱氢酶活力的测定
  • 2.2.7 谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的测定
  • 2.2.8 细胞膜ATP酶活性检测
  • 2.2.9 肝细胞线粒体超微结构的检测——透射电镜法
  • 2.2.10 统计学分析
  • 第三章 结果
  • 3.1 LY-EC对肝细胞生存率的影响
  • 3.2 LY-EC对肝细胞氧化损伤指标的影响
  • 3.2.1 LY-EC对SOD活性的影响
  • 3.2.2 LY-EC对肝细胞GSH含量影响
  • 3.2.3 LY-EC对肝细胞MDA含量的影响
  • 3.3 LY-EC对肝细胞线粒体PTP孔的影响
  • 3.4 LY-EC对肝细胞能量学指标的影响
  • 3.4.1 ATP,ADP和AMP的定性分离结果
  • 3.4.2 LY-EC对肝细胞中ATP、ADP、AMP含量的影响
  • 3.4.3 LY-EC对肝细胞ATP/ADP比值以及EC的影响
  • 3.5 LY-EC对线粒体超微结构的影响
  • 3.6 LY-EC对肝细胞内SDH活性的影响
  • 3.7 LY-EC对肝细胞GST活性的影响
  • 3.8 LY-EC对肝细胞ATP酶的影响
  • 第四章 讨论
  • 4.1 LY-EC对肝细胞抗氧化系统的影响
  • 4.2 LY-EC对肝细胞线粒体结构和功能影响
  • 4.3 LY-EC对肝细胞酶活性的影响
  • 4.4 肝细胞抗氧化系统平衡紊乱与能量代谢障碍之间关系
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 综述
  • 致谢
  • 研究生期间的成绩
  • 相关论文文献

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