从葵花籽中提取绿原酸与制备功能性多肽的研究

论文摘要

本文以葵花籽为原料,首先提取绿原酸；然后采用碱溶酸沉法从中提取分离蛋白,再利用复合酶解法与超声波裂解技术制备小分子葵花籽多肽,经膜技术分离纯化后,对该多肽的抑制亚硝化反应、抗红细胞溶血及抗酒精性肝损伤等作用进行了系统研究。结果表明：1、用醇溶法提取脱脂葵花籽粉中的绿原酸,最佳工艺条件为温度40℃、乙醇浓度50%、pH6.0、料液比1：20浸提时间2h,其得率为2.46%。提取液用正丁醇-冰醋酸-水（4：2：5）作为展开剂进行薄层定性鉴定,发现样品与绿原酸标品在相应位置显现相同的斑点,说明提取物中含有绿原酸。2、试验采用碱溶酸沉法提取葵花籽分离蛋白,然后用碱性蛋白酶和复合酸性蛋白酶两阶段酶解制备葵花籽多肽。在制备过程中结合超声波辅助酶解,可以使该多肽的水解效率明显提高。Tricine-SDS-PAGE电泳和SephadexG-25凝胶层析分析表明,本工艺所得葵花籽多肽的主要成分是小于3.4kDa的多肽,其中3000Da以下的占78.41%。3、前工序得到的葵花籽多肽溶液在操作压力0.3MPa,浓度2%,pH值6.0的条件下依次经过截留量为4000Da和2000Da的超滤膜进行超滤分离,得到4000Da以上（SSP1）、4000～2000Da（SSP2）)和2000Da以下（SSP3）三种不同分子量的葵花籽多肽组分。超滤后的样品用纳滤和反渗透组件进行脱盐处理,结果表明,纳滤和反渗透脱盐率均较高,但是反渗透处理对总氮的损失较大,而纳滤总氮损失率仅为12.17%,综合考虑,只选用纳滤装置进行脱盐处理。4、本研究对SSP1、SSP2和SSP3三种不同分子量的葵花籽多肽进行了体外清除亚硝酸盐和阻断N-二乙基亚硝胺合成的作用,以及抑制红细胞自氧化溶血和H202诱导红细胞氧化溶血等抗氧化活性的比较研究。结果表明,分子量在4000-2000Da的葵花籽多肽（即SSP2）在清除NaNO2、抑制亚硝胺合成以及抑制红细胞氧化溶血等方面的效果最强,是制作食源性防癌和抗氧化剂的理想原料。5、用SSP2葵花籽多肽饲喂小鼠,进行抗酒精性肝损伤实验,结果表明,该组分的高剂量组能使小鼠肝脏中丙二醛含量明显下降,还原性谷胱甘肽含量显著提高；血清中丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶活力明显降低；与肝损伤模型组相比,差异显著（P<0.05）,说明4000-2000Da葵花籽多肽组分对预防酒精性肝损伤有明显的作用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 概述
• 1.2 葵花籽的营养成分及应用价值
• 1.3 绿原酸的研究进展及概况
• 1.3.1 绿原酸的结构及理化性质
• 1.3.2 绿原酸的分布
• 1.3.3 绿原酸的提取方法
• 1.3.4 绿原酸的应用现状
• 1.4 植物多肽的研究进展及概况
• 1.4.1 植物活性肽的研究现状
• 1.4.2 植物多肽的制备
• 1.4.3 多肽的分离纯化
• 1.5 葵花籽多肽国内外研究现状
• 1.6 本论文的研究意义、技术路线和主要内容
• 1.6.1 研究意义
• 1.6.2 技术路线
• 1.6.3 主要研究内容
• 第二章 葵花籽中绿原酸的提取及分析
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 醇溶法提取绿原酸的工艺流程
• 2.2.2 绿原酸薄层定性分析
• 2.2.3 绿原酸含量的测定
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 薄层层析定性鉴定
• 2.3.2 绿原酸特征吸收波长的确定
• 2.3.3 绿原酸标准曲线的绘制结果
• 2.3.4 绿原酸提取的单因素试验结果与分析
• 2.3.5 正交试验设计
• 2.4 本章小结
• 第三章 葵花籽活性多肽的制备
• 3.1 材料与仪器
• 3.1.1 主要试剂
• 3.1.2 主要仪器
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 测定方法
• 3.2.2 葵花籽分离蛋白的制备方法
• 3.2.3 葵花籽分离蛋白的酶解工艺
• 3.2.4 超声波协同辅助酶解制备方法
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 葵花籽分离蛋白的分析
• 3.3.2 葵花籽最佳水解工艺的研究结果
• 3.3.3 超声波协同辅助酶解制备葵花籽多肽
• 3.3.4 Tricine-SDS-PAGE电泳法分析葵花籽多肽分子量分布情况
• 3.4 本章小结
• 第四章 葵花籽活性多肽的分离纯化研究
• 4.1 材料与仪器
• 4.1.1 主要材料与试剂
• 4.1.2 主要仪器
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 葵花籽多肽经多级分离纯化实验流程
• 4.2.2 微滤处理方法
• 4.2.3 超滤处理方法
• 4.2.4 纳滤和反渗透处理
• 4.2.5 SephadexG-25凝胶层析分析方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 不同分子量葵籽多肽超滤分离纯化的研究
• 4.3.2 超滤膜的清洗结果
• 4.3.3 超滤对葵花籽多肽分子量分布的影响
• 4.3.4 小分子量葵花籽多肽纳滤分离纯化研究
• 4.4 本章小结
• 第五章 不同分子量葵花籽多肽的功能特性的研究
• 5.1 材料与仪器
• 5.1.1 主要材料与试剂
• 5.1.2 主要仪器
• 5.2 试验方法
• 2的研究方法'>5.2.1 体外清除NaNO₂的研究方法
• 5.2.2 体外阻断亚硝胺合成的研究方法
• 5.2.3 抑制红细胞自氧化溶血作用的研究方法
• 2O₂诱导红细胞氧化溶血作用的研究方法'>5.2.4 抑制H₂O₂诱导红细胞氧化溶血作用的研究方法
• 5.3 结果与讨论
• 2的清除作用'>5.3.1 葵花籽多肽对NaNO₂的清除作用
• 5.3.2 葵花籽多肽体外阻断亚硝胺合成的作用
• 5.3.3 葵花籽多肽抑制红细胞自氧化溶血的作用
• 2O₂诱导红细胞氧化溶血的作用'>5.3.4 葵花籽多肽抑制H₂O₂诱导红细胞氧化溶血的作用
• 5.4 本章小结
• 第六章 小分子葵花籽多肽抑制酒精性肝损伤的研究
• 6.1 材料与仪器
• 6.1.1 主要材料和试剂
• 6.1.2 主要仪器
• 6.2 试验方法
• 6.2.1 实验动物分组及造型
• 6.2.2 指标观察
• 6.2.3 统计分析
• 6.3 结果与讨论
• 6.3.1 一般状态观察结果
• 6.3.2 血清ALT和AST测定结果与分析
• 6.3.3 肝脏中MDA和GSH含量测定结果与分析
• 6.3.4 肝脏形态学观察结果
• 6.3.5 肝组织病理学切片分析
• 6.4 本章小结
• 参考文献
• 攻读学位期间取得的成果
• 致谢
• 个人简介及联系方式