论文摘要
目的观察急性限制性应激对小鼠接触性皮炎的影响。方法雌性BALA/c小鼠随机分为皮炎组、皮炎+应激组、单纯激发组,每组6只,皮炎组小鼠实验前一天在小鼠腹部去毛,实验第一天和第二天,在小鼠腹部涂擦25μl 0.5%2,4-二硝基氟苯（DNFB）的丙酮/橄榄油溶液（4：1）,第六天,用游标卡尺测量小鼠耳厚度后,在小鼠右耳涂擦25μl 0.25%DNFB的丙酮/橄榄油溶液激发皮炎,而在其左耳涂擦丙酮/橄榄油溶液做为阴性对照。涂药后24小时在同一部位测量小鼠耳厚度,并剪取小鼠耳廓组织,经福尔马林固定24小时,常规石蜡包埋。皮炎+应激组小鼠在实验第六天激发皮炎前给予限制应激一次,其余处理与皮炎组相同。单纯激发组则仅在第六天给予DNFB激发而之前不予致敏。皮炎组小鼠和皮炎+应激组小鼠在抗原激发后用高架十字迷宫评价其焦虑程度。结果皮炎+应激组的开放臂进入次数百分比（OE%）和开放臂停留时间百分比（OT%）均显著低于皮炎组（P<0.05）,说明急性限制应激使小鼠的焦虑程度明显增高。皮炎组小鼠激发皮炎后耳部厚度增加百分比明显高于阴性对照组和单纯激发组（P<0.01）,说明变应性接触性皮炎模型成功建立。皮炎+应激组小鼠诱导皮炎后耳部厚度增加百分比明显高于非应激组（P<0.01）,组织病理显示,皮炎+应激组小鼠耳部厚度明显增加,局部浸润的炎症细胞明显增多,说明在抗原激发前施予急性限制应激能加重小鼠的皮炎。皮炎+应激组小鼠耳厚度增加百分比与OT%呈负相关（P<0.05）。结论急性限制应激能够使小鼠产生焦虑情绪,在抗原激发前给予急性限制应激使小鼠接触性皮炎加重,而小鼠的焦虑情绪与应激对皮炎的影响程度相关。目的观察小鼠被施予急性限制应激后不同时间点脾淋巴细胞NF-κB p65结合活性和IL-18 mRNA表达的变化,观察致敏小鼠在抗原激发前给予急性限制应激后不同时间点脾淋巴细胞NF-κB p65结合活性和IL-18 mRNA表达的变化。方法雌性BALA/c小鼠随机分为三个大组,非致敏组、致敏+应激组和致敏组,非致敏组仅给予限制应激一次,致敏+应激组在实验前一天在小鼠腹部去毛,实验第一天和第二天,在小鼠腹部涂擦25μl 0.5%2,4-二硝基氟苯（DNFB）的丙酮/橄榄油溶液（4：1）,应激组第六天在相同时间给予限制应激一次,应激后立即在小鼠右耳涂擦25μl 0.25%DNFB的丙酮/橄榄油溶液进行抗原激发。致敏组则不予应激,其余处理与致敏+应激组相同。每个大组根据研究的时间点分为应激前（0min）、应激后10分钟（10min）、60分钟（60min）、120分钟（120min）四个小组,每组6只小鼠,在相应的时间点处死小鼠,迅速取其脾脏进行处理。小鼠脾脏分离淋巴细胞后,提取核蛋白检测NF-κB p65结合活性,提取RNA后用半定量RT-PCR法检测IL-18 mRNA的表达。结果非致敏小鼠给予急性限制应激后10分钟时,小鼠脾脏淋巴细胞NF-κB p65结合活性显著高于应激前（P＜0.01）,而应激后60分钟时,其活性与应激前无明显差异（P>0.05）。应激后10分钟、120分钟时IL-18 mRNA的表达与应激前无明显差异（P>0.05）,应激后60分钟时IL-18 mRNA的表达比应激前显著增高（P<0.01）。致敏+应激组小鼠应激后10分钟、60分钟时NF-κB p65结合活性较应激前均显著增高（P<0.01）,应激后10分钟、60分钟时NF-κB p65结合活性较致敏组亦显著增高（P<0.01）,应激后60分钟NF-κB p65结合活性较10分钟时亦显著升高（P<0.01）。致敏+应激组应激后60分钟、120分钟时IL-18 mRNA表达较应激前均显著增高（P＜O.01）,应激后60分钟、120分钟时IL-18 mRNA表达较致敏组亦显著增高（P<O.01）,应激后120分钟IL-18 mRNA表达较60分钟时亦显著升高（P＜O.01）。结论急性限制应激能先后增强NF-κB的活化和IL-18mRNA的表达,在非致敏小鼠为一过性改变,而在致敏小鼠可出现持续性改变,NF-κB和IL-18可能是急性应激加重皮炎的重要介质。目的观察用6-OHDA进行化学性交感神经切除对应激效应的作用。方法化学性交感神经切除的方法：在应激前6、4、2天按200 mg/kg的剂量腹腔注射100μl 6-OHDA溶液（溶媒为含0.01%抗坏血酸盐的PBS溶液）予以化学性交感神经切除,而溶媒对照组则在相同时间点注射不含6-OHDA的溶媒。根据实验流程,分如下小组,每小组6只小鼠：皮炎+应激+6-OHDA组：小鼠按照前文所述诱导皮炎,并在抗原激发前给予急性限制应激,按前述方法注射6-OHDA三次。激发皮炎前及24小时后在同一部位测量小鼠耳厚度,然后剪取小鼠耳廓组织,常规石蜡包埋。皮炎+应激+溶媒对照组：除注射液为溶媒外,其余处理与前一组相同。应激+6-OHDA组：小鼠给予一次限制应激,应激前注射6-OHDA三次。应激后在相应时间点处死小鼠,迅速取其脾脏进行处理,检测其淋巴细胞的NF-κB结合活性和IL-18mRNA的表达。应激+溶媒对照组：小鼠给予一次限制应激,应激前注射溶媒三次。其余处理与前一组相同。致敏+应激+6-OHDA组：小鼠按第二部分所述进行致敏,第六天在相同时间点给予应激,并在应激后立即给予抗原激发,应激前按前述方法注射6-OHDA三次,在相应时间点处死小鼠,迅速取其脾脏进行处理,检测其淋巴细胞的NF-κB的活性和IL-18的表达。致敏+应激+溶媒对照组：应激前按前述方法注射溶媒三次,其余处理与前一组相同。结果皮炎+应激+6-OHDA组与皮炎+应激+溶媒对照组相比较,溶媒对照组的鼠耳厚度增加百分比高于6-OHDA组（P＜O.01）,说明化学性交感神经切除减弱了急性限制应激对皮炎的增强作用。应激+6-OHDA组与应激+溶媒组比较,溶媒组小鼠脾脏淋巴细胞NF-κBp65结合活性显著高于6-OHDA组（P<0.01）,溶媒组小鼠脾脏淋巴细胞的IL-18 mRNA表达亦显著高于6-OHDA组（P<0.01）,6-OHDA减弱了急性应激诱导非致敏小鼠NF-κB活化和IL-18 mRNA表达的作用。致敏+应激+6-OHDA组与致敏+应激+溶媒组小鼠相比较,在相应的时间点上,溶媒对照组小鼠的脾脏淋巴细胞NF-κB p65活性均高于6-OHDA组（P＜0.01）,在IL-18 mRNA的表达上,应激后10分钟时,两组间无明显差异（P>0.05）,在60分钟和120分钟时,溶媒组明显高于6-OHDA组（P<0.01）,显示6-OHDA减弱了急性应激诱导致敏小鼠NF-κB活化和IL-18 mRNA表达的作用。结论化学性交感神经切除能够消除急性精神应激对皮炎的加剧作用,并能减弱应激对NF-κB和IL-18这两个炎症因子的激活作用。急性精神应激对皮炎的作用的可能路径是通过交感神经释放NE,作用于淋巴细胞上的肾上腺素能受体,引起细胞内NF-κB活化,然后促进IL-18的表达,使皮肤炎症反应加重。