板蓝根多糖MPEG-PLA微球的制备及免疫调节作用研究

论文摘要

本试验探索板蓝根多糖的纯化工艺,运用正交设计筛选制备板蓝根多糖MPEG-PLA聚合物微球的最佳工艺,采用最佳工艺制备所得微球免疫小鼠,并测定小鼠血液的常规指标、总IgG水平和腹腔巨噬细胞吞噬能力等一些特异性和非特异性指标。1.板蓝根多糖的提取和纯化选取菘蓝系板蓝根,经机器粉碎得到200目的板蓝根粉末,采用改良型水提醇沉法来提取板蓝根多糖,结合蒽酮硫酸法和可见紫外分光光度计计算板蓝根多糖的提取率。纯化板蓝根多糖时选用Sephadex G-75凝胶柱,通过柱子的分子筛效应,可以将板蓝根粗多糖分成5种成分。结果显示,板蓝根多糖的多次提取率约为11%～12%；本方法提取的多糖含有5个多糖纯化收集峰。2.板蓝根多糖MPEG-PLA嵌段聚合物微球的制备本试验选取MPEG（2000）-PLA和MPEG（6000）-PLA两种聚合物,采用复乳法并设计正交试验来制备板蓝根多糖MPEG-PLA嵌段聚合物微球,通过计算各工艺组所得微球的包封率、观察各组微球的外貌形态、比较各组微球饿粒径大小和分布及体外释药曲线4个方面初步探索制备板蓝根多糖MPEG-PLA嵌段聚合物微球的最佳工艺。结果显示,聚合物分子量应选MPEG（2000）-PLA嵌段共聚物,MPEG（2000）-PLA嵌段共聚物浓度为100ug/ml, MPEG（2000）-PLA-二氯甲烷作为油相为固定体积20ml；板蓝根多糖体积为10ml,浓度为0.06g/ml; PVA浓度为0.5%,PVA为外水相体积为100ml；搅拌速度为16000rpm。3.载板蓝根粗多糖MPEG（2000）-PLA聚合物微球对小鼠免疫力的影响本试验将32只昆明雌性小鼠随机分成8组,第1组到第8组依次为注射0.2ml板蓝根多糖MPEG（2000）-PLA嵌段共聚物微球和空白MPEG（2000）-PLA嵌段共聚物微球高浓度组（200mg/ml）、中浓度组（100mg/ml）、低浓度组（50mg/ml）、板蓝根多糖组2mg/ml和生理盐水组,其中板蓝根多糖和生理盐水组连续给药3天,载糖微球和空白微球组只给药1天。通过综合考察小鼠在给药第7天和第14天的血常规和总IgG水平的结果,载糖微球3个浓度组的淋巴细胞总数和总IgG水平都明显高于空白微球组和生理盐水对照组,并且随着时间的延长,载糖微球中浓度组（100mg/ml）的免疫效果好于只用板蓝根多糖组；任选上述32只实验小鼠用同样分组和方法进行巨噬细胞吞噬功能试验,结果显示,载糖微球3个浓度组的效果都低于板蓝根多糖组,但显著高于空白微球组和生理盐水组。4.载板蓝根粗多糖MPEG（2000）-PLA聚合物微球对体外培养鸡脾淋巴细胞增殖的影响本试验共分成板蓝根多糖MPEG（2000）-PLA嵌段共聚物微球600ug/ml、300ug/ml、150ug/ml、空白微球300ug/ml、板蓝根多糖300ug/ml、刀豆蛋白A（ConA） 10ug/ml和生理盐水7组,分别作用于提取分离到的同一浓度的鸡脾淋巴细胞,每组重复5孔。结果显示,随着载糖微球浓度升高,OD450值也变大,载糖微球组显著高于空白微球组和生理盐水组。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 符号及缩略语
• 文献综述
• 第一章 板蓝根多糖研究进展
• 1 板蓝根多糖提取方法
• 2 生理药理学作用
• 2.1 抗病毒作用
• 2.2 清除自由自作用
• 2.3 对机体免疫系统的调节作用
• 3 展望
• 第二章 MPEG-PLA共聚物的研究进展
• 1 聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物（MPEG-PLA）的合成及性质
• 1.1 MPEG-PLA的合成
• 1.2 MPEG-PLA的性质
• 2 MPEG-PLA共聚物在靶向给药系统中的应用
• 2.1 微球
• 2.2 纳米粒
• 2.3 胶束
• 3 小结与展望
• 引言
• 试验一 板蓝根多糖的提取及纯化
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 板蓝根
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要仪器与设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 板蓝根多糖的制备
• 1.2.2 粗多糖的分离纯化
• 1.2.2.1 Sephadex G-75凝胶预处理
• 1.2.2.2 装柱
• 1.2.2.3 平衡
• 1.2.2.4 样品洗脱
• 1.2.3 板蓝根多糖含量的测定
• 1.2.3.1 标准曲线的制定
• 1.2.3.2 含糖率的测定
• 2 结果
• 2.1 板蓝根粗多糖提取率
• 2.2 板蓝根粗多糖纯化后的成分
• 3 分析讨论
• 试验二 板蓝根多糖MPEG-PLA微球的制备
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要试剂
• 1.1.1.1 板蓝根粗多糖
• 1.1.1.2 MPEG（2000）-PLA和MPEG（6000）-PLA嵌段聚合物
• 1.1.1.3 PVA（1799）
• 1.1.1.4 化学试剂
• 1.1.2 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 复乳法制备微球
• 1.2.2 正交工艺设计
• 1.2.3 所得微球理化性质的测定
• 1.2.3.1 微球包封率和载药量的测定
• 1.2.3.2 外貌形态分析
• 1.2.3.3 粒径和表面电势测定
• 1.2.3.4 体外累积释药曲线的绘制
• 2 结果
• 2.1 正交工艺所得各组微球的粒径和包封率
• 2.2 微球的载药量
• 2.3 外貌形态结构
• 2.4 粒径和表面电势
• 2.5 体外释放曲线
• 3 分析讨论
• 试验三 板蓝根多糖微球对小鼠免疫力及体外培养鸡脾淋巴细胞转化的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要试剂及常用溶液的配制
• 1.1.2 主要仪器
• 1.1.3 药物和实验动物
• 1.2 方法
• 1.2.1 对小鼠免疫力的影响
• 1.2.1.1 药物的配制和分组
• 1.2.1.2 腹腔注射药物
• 1.2.1.3 小鼠血液常规指数的检测及变化趋势
• 1.2.1.4 小鼠血液中总IgG水平检测及变化趋势
• 1.2.1.5 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能试验
• 1.2.2 体外培养鸡脾淋巴细胞淋转试验
• 1.2.2.1 鸡脾淋巴细胞的制备
• 1.2.2.2 药物配制和分组
• 1.2.2.3 鸡淋巴细胞转化试验（WST-8法）
• 1.2.3 数据分析
• 2 结果
• 2.1 对小鼠免疫力影响测定结果
• 2.1.1 各试验组血液免疫细胞指数结果
• 2.1.2 小鼠血液中总IgG水平检测结果
• 2.1.3 巨噬细胞吞噬功能试验结果
• 2.2 对体外培养的鸡脾淋巴细胞转化的影响
• 3 分析讨论
• 3.1 对小鼠免疫细胞数量有调节作用
• 3.2 对小鼠血液总IgG水平的影响
• 3.3 对体外培养的鸡脾淋巴细胞转化的促进作用
• 参考文献
• 全文结论
• 英文摘要