不同年龄段白斑红点鲑消化道内分泌细胞的比较研究

论文摘要

本研究应用Grimelius硝酸银反应法,酶标免疫技术中的生物素-卵白素复合法,对不同年龄段白斑红点鲑消化道各部位内分泌细胞进行嗜银染色及利用5-羟色胺（5-HT）、生长抑素（SS）、胃泌素（GAS）、胰高血糖素（Glu）、胰多肽（PP）和P-物质（SP）六种特异性抗血清,对不同年龄段白斑红点鲑消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位并对其细胞形态和分布位置进行观察研究,对其分布密度进行统计分析,并综合上述研究结果在该鱼的食性、生境、分类地位等方面进行比较讨论。结果显示,不同年龄段白斑红点鲑消化道的内分泌细胞基本形态同其它脊椎动物相相近或相同,但分布密度却有很大差异。嗜银细胞在不同年龄段白斑红点鲑的胃贲门部、胃体和胃幽门部均有分布,且在1龄白点鲑鱼消化道的食管处也发现嗜银细胞的分布;而在消化道的肠道各处如:幽门盲囊肠、前肠、中肠、后肠以及直肠中却未观察到嗜银细胞。从嗜银细胞的分布密度来看,2龄和3龄白点鲑的嗜银细胞都是在胃体处分布密度最高,胃幽门部次之,胃贲门部最低;而1龄白点鲑的嗜银细胞最高密度出现在胃贲门部,食管部次之,幽门部最少。白斑红点鲑的嗜银细胞形态多种多样:1龄白斑红点鲑消化道嗜银细胞主要呈锥体型并兼有椭圆形,圆形和梭型;2龄,3龄鱼的消化道嗜银细胞形态同样以锥体型为主但圆形及梭型细胞数量有所减少直至消失。而在免疫组化实验方面,本研究在不同年龄段白斑红点鲑消化道内,可以检测到5-羟色胺免疫活性内分泌细胞（简称5-HT细胞）和生长抑制素免疫活性内分泌细胞（简称SS细胞）。靶细胞显示为深棕色或红棕色,背景为蓝色,色差强,易区分。但在不同年龄段白斑红点鲑消化道各处均未发现PP细胞、Glu细胞、GAS细胞和SP细胞的分布。5-HT免疫活性细胞在不同年龄段白斑红点鲑的胃贲门部、胃体和胃幽门部中均有分布,本研究还在1龄白点鲑的食管处也检测出了该种免疫活性细胞。但在消化道的其它各处,如幽门盲囊肠、前肠、中肠、后肠以及直肠中未发现有5-HT免疫活性细胞。从5-HT细胞的分布密度来看,1龄及2龄白点鲑鱼的胃贲门部分布密度最高,而3龄白点鲑鱼的细胞密度峰值出现在胃体处。不同年龄段白斑红点鲑的SS免疫活性细胞分布于消化道的胃贲门部、胃体和胃幽门部,而通过研究发现,1龄白点鲑鱼的食管处也有少量分布。但在肠道各段均未发现SS免疫活性细胞。从SS细胞的分布密度来看,胃贲门部分布密度最高,胃部次之。从细胞形态角度分析,各个年龄段的白斑红点鲑的细胞形态呈多样性分布:1龄白斑红点鲑的消化道中,内分泌细胞多以锥体形为主,同时也兼有椭圆形,圆形及梭型的细胞;而2龄,3龄鱼的消化道内分泌细胞的形态也以锥体型为主,但其形态种类则有所减少,有些部位圆形和梭形细胞数量显著减少并消失。根据白斑红点鲑内分泌细胞的形态分析,本研究认为白斑红点鲑消化道的内分泌细胞具有内分泌和外分泌功能。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 绪论
• 1.1 国内外消化道内分泌细胞的研究进展
• 1.1.1 消化道内分泌细胞系统简介
• 1.1.2 内分泌细胞研究历程
• 1.1.3 国内外消化道内分泌细胞研究进展
• 1.2 研究的目的和意义
• 第2章 不同年龄段白斑红点鲑消化道嗜银细胞的比较研究
• 2.1 嗜银实验材料
• 2.1.1 嗜银实验动物
• 2.1.2 嗜银实验试剂
• 2.1.3 实验仪器设备
• 2.1.4 嗜银实验试剂配制
• 2.1.4.1 改良固定剂的配制
• 2.1.4.2 银染液
• 2.1.4.3 还原液
• 2.1.4.4 粘片剂
• 2.2 嗜银实验方法
• 2.2.1 制备石蜡切片
• 2.2.1.1 实验材料的脱水
• 2.2.1.2 实验材料的透明
• 2.2.1.3 实验材料的包埋
• 2.2.1.4 制备石蜡切片
• 2.2.2 染色实验步骤
• 2.2.3 细胞计数及统计分析
• 2.2.4 嗜银细胞的图像采集
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 不同年龄段白斑红点鲑嗜银细胞在消化道中的形态特征与分布密度
• 2.3.1.1 不同年龄段白斑红点鲑嗜银细胞的形态特征
• 2.3.1.2 对相同年龄段白斑红点鲑不同部位嗜银细胞分布密度的统计结果
• 2.3.1.3 不同年龄段白斑红点鲑同一部位嗜银细胞分布密度的多重比较结果
• 2.4 讨论
• 2.5 本章小结
• 第3章 不同年龄段白斑红点鲑消化道内分泌细胞免疫组织化学研究
• 3.1 免疫组化实验材料
• 3.1.1 免疫组化实验动物
• 3.1.2 免疫组化主要试剂
• 3.1.3 免疫组化其它试剂
• 3.1.4 免疫组化仪器设备
• 3.1.5 免疫组化试剂配制
• 3.1.5.1 固定剂液的配制
• 3.1.5.2 粘片剂
• 3.1.5.3 磷酸缓冲液
• 3.1.5.4 显色液：DAB
• 3.1.5.5 配制免疫组化试剂
• 3.1.5.6 准备载玻片
• 3.1.5.7 免疫组化用具灭菌
• 3.2 ABC 免疫组化实验方法
• 3.2.1 石蜡切片的制备
• 3.2.2 免疫组织化学染色
• 3.2.2.1 脱蜡、复水
• 3.2.2.2 免疫ABC 染色
• 3.2.3 细胞数量统计
• 3.2.4 细胞形态及位置的图像采集
• 3.2.5 实验对照
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 5-HT 细胞在各年龄段白斑红点鲑消化道中的分布
• 3.3.1.1 5-HT 细胞在各年龄段白斑红点鲑消化道中的分布位置和形态学特征
• 3.3.1.2 同一年龄段白斑红点鲑消化道不同部位5-HT 细胞密度分布的统计结果
• 3.3.1.3 不同年龄段白斑红点鲑消化道同一部位5-HT 细胞分布密度的多重比较结果
• 3.3.2 SS 细胞在各年龄段白斑红点鲑消化道中的分布
• 3.3.2.1 SS 细胞在各年龄段白斑红点鲑消化道中的分布位置和形态学特征
• 3.3.2.2 同一年龄段白斑红点鲑消化道不同部位SS 细胞密度分布的统计结果
• 3.3.2.3 不同年龄段白斑红点鲑消化道同一部位SS 细胞密度分布的多重比较结果
• 3.4 讨论
• 3.4.1 5-HT 细胞的分布范围及分布型
• 3.4.2 SS 细胞的分布范围及分布型
• 3.4.3 内分泌细胞的两种分泌方式
• 3.4.3.1 内分泌
• 3.4.3.2 外分泌
• 3.4.4 白斑红点鲑各年龄段与内分泌细胞的数量之间的关系
• 3.4.5 白斑红点鲑各年龄段与内分泌细胞的形态之间的关系
• 3.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 图版
• 图版说明
• 攻读硕士期间发表的论文
• 致谢