放线杆菌血清抗体与阿米卡星复合物靶向性研究

论文摘要

为了将猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体与硫酸阿米卡星偶联,以及偶联后不会使硫酸阿米卡星的药效及猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体的生物学活性丧失或严重降低。本实验首先从病料中分离鉴定猪传染性胸膜肺炎放线菌并以之为菌种制备油乳佐剂灭活苗,然后用制备的油乳佐剂灭活苗多次经浅层肌肉注射免疫健康家兔,最后一次免疫21d后采血分离制备血清,用间接ELISA检测抗猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体效价,血清抗体的间接ELISA效价为1：2048。然后对猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体与硫酸阿米卡星的偶联条件进行筛选,用不同浓度硫酸阿米卡星、血清抗体、PEG6000,建立方阵试验,通过收率比较筛选出偶联最佳配方为：硫酸阿米卡星600(mg)：血清抗体3(μg)：PEG600015(g)。偶联物革兰氏染色、聚丙烯酰胺电泳、电镜观察结果显示硫酸阿米卡星与血清抗体偶联良好。为了探讨偶联物的靶向性,本实验对偶联物进行间接ELISA、间接免疫荧光及免疫电镜检测。间接ELISA检测表明：二者的偶联对抗体的抗原性没有影响；免疫荧光及免疫电镜显示偶联物具有猪传染性胸膜肺炎放线菌特异性靶向性。偶联物与猪传染性胸膜肺炎放线菌菌液混合3min后,偶联物能与猪传染性胸膜肺炎放线菌作用；偶联物与猪传染性胸膜肺炎放线菌菌液混合7min后,偶联物能进入猪传染性胸膜肺炎放线菌菌体内。而血清抗体与猪传染性胸膜肺炎放线菌菌液混合4min后,血清抗体能与猪传染性胸膜肺炎放线菌作用；血清抗体与猪传染性胸膜肺炎放线菌菌液混合9min后,血清抗体能进入猪传染性胸膜肺炎放线菌菌体内。这些实验结果表明该偶联工艺可增强抗体的靶向作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 参考文献
• 第二章 猪传染性胸膜肺炎放线菌多克隆抗体与丁胺卡那霉素偶联物的制备
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 猪传染性胸膜肺炎放线菌分离鉴定及冻存保种结果
• 2.2 猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体制备及纯化结果
• 2.3 猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体间接ELISA效价
• 2.4 猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体含量检测结果
• 2.5 猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体与硫酸阿米卡星结合条件
• 2.6 猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体与硫酸阿米卡星偶联物PAGE电泳结果
• 2.7 偶联物革兰氏染色结果
• 2.8 偶联物扫描电镜观察
• 2.9 偶联物稳定性检测结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 第三章 猪传染性胸膜肺炎放线菌血清抗体与PEG6000和硫酸阿米卡星复合物的靶向性研究
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 偶联物与猪传染性胸膜肺炎放线菌抗血清抗体间接ELISA效价比较结果
• 2.2 复合物免疫荧光
• 2.3 复合物免疫电镜观察
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢