SiRNA技术沉默Stat3对膀胱肿瘤的生长抑制作用

论文摘要

目的:研究Stat3基因沉默在膀胱癌细胞增殖凋亡中的作用并探讨其相关机制。方法:（1）应用免疫组织化学染色方法检测膀胱移行细胞癌标本中Stat3蛋白表达情况。（2）以Stat3己知序列为靶点,构建能够稳定表达Stat3 siRNA的重组质粒。（3）应用真核细胞转染技术转染膀胱癌细胞株T24,观察Stat3的表达及对细胞凋亡的影响。（4）复制裸鼠膀胱癌皮下移植瘤模型及膀胱癌原位移植瘤模型,应用沙门氏菌运载特异性siRNA-Stat3表达载体对膀胱肿瘤作用观察。结果:（1）Star3的表达随膀胱肿瘤病理分级的等级的升高而增加。（2）成功构建pSilencerTMneo 3.1-H1-Stat3 siRNA表达质粒。（3）体外实验证明该质粒对膀胱癌细胞具有增殖抑制及促进凋亡的作用。（4）体内实验证明Si-Stat3具有明显抑制肿瘤的生长作用。（5）减毒沙门氏菌可以运载质粒到达深部肿瘤并可起到抑制肿瘤生长的作用。结论:采用Stat3特异性siRNA基因表达系统对膀胱癌的治疗取得了显著效果;并首次以减毒鼠伤寒沙门氏菌为siRNA-Stat3运载体进行膀胱肿瘤的有效靶向治疗。本研究所采用的技术路线及实验结果在国内外均未见报道。

论文目录

• 提要
• 绪论
• 第一章 文献综述
• 第一节 癌基因Stat3与肿瘤研究进展
• 一、Stat3的结构功能
• 二、Stat3信号转导及活化转录机制
• 三、Stat3与肿瘤
• 四、Stat3与肿瘤的基因治疗
• 第二节 RNA干涉及其在基因治疗中的研究进展
• 一、RNAi研究的历史与现状
• 二、RNAi的机制
• 三、RNAi的应用
• 四、RNAi的问题与前景
• 五、siRNA的设计与合成
• 第三节 减毒沙门氏菌在肿瘤基因治疗中的研究进展
• 一、沙门氏菌的生物学侵入
• 二、沙门氏菌作为基因传递载体
• 三、沙门氏菌在肿瘤组织优先浓集的机制
• 四、重组减毒沙门氏菌在树突状细胞中的表达
• 五、减毒沙门氏菌在肿瘤基因治疗领域的应用
• 六、问题与展望
• 第二章 实验研究
• 实验一 Stat3在膀胱移行细胞癌和T24细胞株中的表达及其与病理分级、预后的关系
• 一 材料与方法
• 二 结果
• 三 讨论
• 四 结论
• 五 参考文献
• 实验二 RNAi沉默Stat3对人膀胱癌T24细胞株的生长抑制实验
• 一 材料与方法
• 二 结果
• 三 讨论
• 四 小结
• 五 参考文献
• 实验三 以减毒沙门氏菌为siRNA-Stat3质粒运载体抑制膀胱癌的体内研究
• 一 材料与方法
• 二 结果
• 三 讨论
• 四 小结
• 五 参考文献
• 第三章 结论
• 综述参考文献
• 攻读博士学位期间所发表的学术论文
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢