(5-羟基-4-氧代-4H-苯并吡喃-3-基)-苯甲酰腙诱导人肝癌细胞周期停滞及凋亡的机制研究

论文摘要

目的：探讨新型黄酮化合物（5-羟基-4-氧代-4H—苯并吡喃-3-基）-苯甲酰腙（（5-hydroxy-4-oxo-4H-chromene-3-yl）-benzoyl hydrazone，L1b）对人肝癌细胞HepG2细胞周期调控及诱导凋亡的机制。方法：不同浓度L1b处理HepG2细胞16、24、32、48小时后，用SRB法测定其对细胞增殖抑制作用，计算IC50值；集落形成试验测定克隆形成率；相差显微镜观察细胞形态的改变；琼脂糖凝胶电泳检测L1b对HepG2细胞DNA的损伤作用；PI染色后，用流式细胞仪检测L1b对HepG2细胞周期的影响；荧光显微镜和透射电子显微镜观察L1b诱导HepG2细胞凋亡状况；Western blot检测L1b对胞内MDM2、P53、P21蛋白的变化。结果：L1b能抑制HepG2和L02细胞的增殖，且呈浓度依赖关系，24小时后对HepG2和L02两种细胞的IC50值分别为109.67μg/ml和90.38μg/ml，但对两种细胞抑制增殖作用差别不大；L1b能造成HepG2细胞克隆形成能力下降，最高浓度作用24小时后，HepG2细胞克隆形成率下降到到3.7％，与正常对照组比较差异显著（p＜0.01）；相差显微镜观察L1b体外能使HepG2细胞收缩、失去固有形态；荧光显微镜和透射电镜结果均显示L1b能诱导HepG2细胞凋亡；流式细胞仪检测出细胞周期停滞在G1期和G2期，G1期和G2期细胞百分含量分别由对照组的52％和0.3％上升到62.9％和6.1％，同时细胞出现凋亡特征性的亚二倍体峰；琼脂糖凝胶电泳检测发现L1b能造成细胞DNA损伤并出现梯状条带；Western blot检测发现L1b能诱导细胞P53和P21蛋白表达量升高，而MDM2蛋白表达量未见明显改变。结论：L1b能有效抑制HepG2细胞增殖，通过上调p53基因和P53下游p21基因的表达诱导HepG2细胞周期阻滞在G1期和G2期。L1b通过P53途径诱导HepG2细胞凋亡。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1.肿瘤与细胞周期调控
• 2.肿瘤与细胞凋亡
• 3.DNA损伤与肿瘤
• 4.P53与DNA损伤信号调节
• 5.以p53信号通路为靶点药物研究进展
• 6.本文研究的目的
• 材料与方法
• 1.材料
• 2.方法
• 2.1 细胞培养和化合物处理
• 2.2 细胞增殖抑制试验
• 2.3 集落形成试验测定克隆形成率
• 2.4 琼脂糖凝胶电泳检测DNA损伤
• 2.5 相差显微镜观察细胞形态改变
• 2.6 荧光显微镜观察细胞凋亡
• 2.7 透射电镜观察细胞凋亡
• 2.8 细胞凋亡的测定及细胞周期分析
• 2.9 Western blot测定P53、P21、MDM2蛋白表达
• 结果
• 1.L1b抑制HepG2细胞增殖
• 2.降低HepG2细胞集落形成能力
• 3.L1b引起HepG2细胞形态学改变
• 1期和G₂期'>4.L1b阻滞HepG2细胞周期阻滞在G₁期和G₂期
• 5.L1b致使HepG2细胞DNA片段化
• 6.L1b诱导HepG2细胞凋亡
• 7.L1b作用对HepG2细胞MDM2、P53、P21表达量的改变
• 讨论
• 1.L1b抑制HepG2细胞增殖
• 1期和G₂期阻滞'>2.L1b造成HepG2细胞发生G₁期和G₂期阻滞
• 3.L1b诱导HepG2细胞凋亡
• 4.L1b引起HepG2细胞MDM2、P53、P21表达量变化
• 结论
• 参考文献
• 致谢