温胆汤对实验性大鼠精神分裂症的作用及其机制研究

论文摘要

目的温胆汤临床治疗疾病的范围十分广泛,其中以癫狂为著。“癫狂”为现代医学的精神分裂症,祖国医学治疗癫狂,多从“痰”入手,强调理气化痰。温胆汤是一首化痰经典名方,临床用治“无形之痰”所致的精神疾患。本实验分别从精神分裂症谷氨酸（Glu）功能低下和多巴胺（DA）功能亢进两个发病机制全面系统地探讨温胆汤的作用及其作用机理,从行为学、神经突触传递效能、受体水平、免疫组织化学、神经生化和病理学、氧自由基及免疫等方面,探讨温胆汤对精神分裂症模型鼠学习记忆及突触传递长时程增强（LTP）的影响,对实验性模型鼠大脑皮层、海马和纹状体中Glu、DA及代谢产物变化的影响,观察温胆汤对模型鼠纹状体多巴胺D2受体、海马GLU和N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR1、NR2B表达的影响及病理损伤的保护作用,并通过研究温胆汤对模型鼠体内自由基、一氧化氮（NO）、T细胞亚群、白细胞介素-2（IL-2）动态变化的影响,观察其抗氧化损伤和免疫调节的作用,试图初步探讨温胆汤对谷氨酸—γ-氨基丁酸—多巴胺神经元功能的网络调控作用,探讨氧自由基、NO和免疫与精神分裂症的关系及其在精神病理中的作用,希望能为精神分裂症的发病机制和防治方法提供新的启示和思路,为温胆汤的临床推广应用提供可靠、系统的实验依据。方法本实验分别从NMDA受体拮抗剂MK801和DA受体激动剂APO所诱导不同的精神分裂症大鼠模型,系统研究温胆汤的治疗作用及其作用机制。1.选用MORRIS水迷宫整体行为学检测方法,观察温胆汤对模型鼠学习记忆功能的影响；对精神分裂症模型鼠PP-DG突触的功能可塑性及其表现形式进行在体电生理观察,从电生理角度阐明温胆汤改善模型鼠学习记忆的机理。2.应用高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FD）和电化学检测法（HPLC-ECD）分别测定Glu、γ-氨基丁酸（GABA）、天冬氨酸（ASP）和DA及其代谢产物3,4—二羟基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）的含量,探讨温胆汤对模型鼠Glu和DA系统的调节作用。3.从免疫组织化学和神经病理形态学的改变,观察温胆汤对模型鼠海马GLU和NMDA受体亚单位NR1、NR2B表达的影响及对模型鼠海马病理损伤的保护作用。4.通过DA受体结合实验,观察温胆汤对模型鼠纹状体D2受体亲和力与数量表达的影响,从受体水平探讨温胆汤抗精神分裂症的作用机理。5.测定大鼠自由基超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶和一氧化氮的活性,并采用流式细胞仪对T.C亚群CD3、CD4和CD8进行定量检测,用双抗体夹心ELISA法检测大鼠血清IL-2含量,探讨温胆汤抗精神分裂症模型鼠氧化损伤和免疫调节的作用。结果1.行为学测试结果表明,Morris水迷宫实验中,与模型组相比,温胆汤组大鼠的潜伏期明显缩短、跨台次数明显增加；在突触传递效能实验中,温胆汤能改善模型鼠海马齿状回基础突触传递效能,提高HFS所诱导的模型大鼠齿状回PS幅值,缩短峰的潜伏期,并能提高模型大鼠HFS后LTP的维持能力。提示温胆汤改善学习记忆的作用机理可能是增强大鼠突触传递活动的可塑性,通过增加模型鼠中枢Glu的含量和功能、阻止或延缓海马神经元细胞的变性损伤来提高学习记忆能力的。2.NMDA受体拮抗剂MK801诱导的精神分裂症模型鼠,其前额皮质、海马中Glu、ASP的含量明显降低,GABA的含量升高,纹状体中DA、DOPAC、HVA的含量比正常组和温胆汤组明显增高；而使用温胆汤组的Glu、ASP的含量有所升高,DA及其代谢产物有所降低。提示我们,精神分裂症动物模型中Glu和DA系统均有改变,二者存在相互调节作用；温胆汤可以调节模型鼠脑内Glu和DA系统的功能异常。3.形态学结果观察显示,各组大鼠海马GLU和NMDA受体NR1、NR2B亚单位的表达存在差异,且海马CA1区细胞结构及细胞变性情况也存在很大差别,温胆汤可以改善模型组大鼠海马CA1区细胞排列紊乱、松散稀疏现象,减轻海马细胞核溶缩和固缩,延缓海马细胞的变性过程,说明温胆汤对模型鼠海马区的病理损伤有一定的保护作用。4.用APO诱导的模型鼠均出现了闻、咬、舔等刻板行为,活动十分明显,而正常组大鼠无此运动,与模型组比较,温胆汤组大鼠刻板行为在20分钟后受到抑制。说明温胆汤具有对抗APO引起的刻板行为的作用。D2受体竞争结合实验显示,温胆汤可减少突触前膜D2受体数目,增高与D2受体结合的亲和力,它可能通过阻滞D2受体发挥抗精神分裂症的作用。5.本实验模型组大鼠血浆SOD、CAT含量明显较正常组和温胆汤组低,脂质过氧化物（MDA）增多,而用温胆汤治疗大鼠的SOD、CAT都有一定程度的升高,说明温胆汤能加大清除大鼠体内自由基、降低过氧化损伤,具有抗模型鼠氧化损伤的作用。此外,模型组大鼠血浆NO活性较正常组和温胆汤组升高,温胆汤组的NO较模型组降低,提示温胆汤可能通过降低NO的活性,阻止NO参与谷氨酸神经毒性作用而发挥其治疗作用。6.流式细胞和双抗体夹心ELISA检测显示,各组大鼠T.C亚群CD3、CD4和IL-2的含量存在差异,模型组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IL-2显著比正常组和温胆汤组低,各组间CD8+的差异不大；使用温胆汤组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IL-2都有所升高,说明温胆汤能调节模型鼠血中T.C亚群和IL-2的含量,提示温胆汤可能通过促使某一特定的T细胞群体的克隆性扩增,通过Th细胞数目及功能的提高来增强精神分裂症模型鼠整体的免疫功能。结论综上所述,温胆汤对实验性大鼠精神分裂症有较好的治疗作用。该方的作用机制可能与调节脑内Glu和DA的功能异常及失衡、阻滞D2受体、增强海马细胞突触的可塑性、保护海马免受病理损伤、减轻氧自由基引起的损害、提高体内免疫调节功能等相关。本研究为温胆汤的进一步开发利用提供了系统的实验依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分 基于精神分裂症谷氨酸发病机制的系列研究
• 实验1 温胆汤对MK801诱发模型鼠学习记忆的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 分析与讨论
• 实验2 温胆汤对MK801诱发模型鼠突触传递效能的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 分析与讨论
• 实验3 温胆汤对MK801诱发模型鼠Glu、DA及代谢产物的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 分析与讨论
• 实验4 温胆汤对MK801诱发模型鼠海马GLU和NMDA受体亚单位表达及病理损伤的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 分析与讨论
• 第二部分 基于精神分裂症多巴胺发病机制的系列研究
• 实验5 温胆汤对APO诱发模型鼠刻板行为及DA受体的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 分析与讨论
• 实验6 温胆汤对APO诱发模型鼠氧自由基、NO的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 分析与讨论
• 实验7 温胆汤对APO诱发模型鼠T.C亚群、IL-2的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 分析与讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 缩略词表
• 文献综述
• 综述一
• 综述二
• 综述三
• 攻读学位期间主要研究成果及发表论文