特异性相互作用毛细管电色谱法筛选中药活性成分

论文摘要

中药是中国千年传统文化的积淀,也是中华民族的瑰宝。但中药因其成分复杂,药效组分模糊而限制了其国际化、现代化的步伐。如何对目标药物进行筛选,找出药效明确的活性成分便成为中药现代化发展的关键。传统的药物筛选方法是以动物模型为基础,这种方法虽然能够得到较为可靠的目标活性物质,但是其周期很长,成本也非常高,还会受到环境的影响。受体学说的阐明,为药物筛选提供了新的思路,以受体为靶分子的药物筛选也就应运而生,这种方法可与多种分析手段结合,目的性更强,且能大大缩短筛选的周期,成为了当今药物筛选中较为重要的一种方法。本研究采用血小板作为靶分子建立开管毛细管电色谱法,对中药丹参和三七中抗/促血小板活性成分进行筛选。为进一步评价血小板和活性成分之间相互作用力的强度,本研究首次推导出了适用于所建立方法的结合常数计算公式,从而能够定量评价复杂体系中活性成分与血小板的相互作用。本文的研究内容如下:①建立了一种新的开管毛细管电色谱方法,利用物理吸附的方式将血小板固定于毛细管内壁,通过改变固定长度,研究样品在其中的迁移行为变化,并根据迁移淌度与血小板涂层长度之间的线性方程,得到目标组分与血小板相互作用的结合常数。通过对血小板浓度,洗脱剂,运行缓冲液等影响因素的考察和优化,得到了本方法的适用条件。最后将所建立的方法应用到了HSA与帕珠沙星相互作用的评价中,所得结合常数与文献值较为相符,从而证明了本方法能够用于药物-受体的相互作用强度评价。②将此方法应用于阳性药物阿司匹林、阴性药物帕珠沙星与血小板的相互作用中,通过荧光光谱法和亲和萃取法的验证,证明了本方法所建立的结合常数计算公式,能够对特异性相互作用进行评价。③将此方法应用于核苷混合物中抗/促血小板成分的筛选中,首先通过各核苷在不同血小板涂层长度下的峰型变化,定性筛选出了抗/促血小板的成分,然后再将这些成分单独与血小板进行实验,得到了其与血小板的结合常数,从而定量地评价了这些成分与血小板之间的相互作用力。④将此方法应用于实际中药丹参和三七提取物中抗/促血小板活性成分的筛选,并计算出了各峰所对应的成分与血小板之间的结合常数,通过比较结合常数值的大小,得到了这些峰所对应的成分与血小板相互作用的强度,为进一步筛选提供了数据参考。⑤对九种野生菌/食用菌中核苷成分进行了定性定量分析,得到了各野生菌/食用菌中核苷的种类及含量,通过对各野生菌中核苷成分的分析,初步预测了具有潜在抗/促血小板功能的野生菌/食用菌,为其药理作用的进一步探索奠定了基础。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 绪论
• 1.1 药物与受体相互作用强度与药效的关系
• 1.2 血小板及其膜受体概述
• 1.2.1 血小板的概述及其凝血机理
• 1.2.2 血小板膜受体概述
• 1.2.3 药物与血小板受体的作用机制
• 1.3 特异性相互作用的评价方法
• 1.3.1 生物学方法
• 1.3.2 生物色谱法
• 1.3.3 亲和萃取法
• 1.3.4 亲和毛细管电泳法
• 1.3.5 毛细管电色谱法
• 1.4 本课题研究的理论基础及创新点
• 1.4.1 亲和相互作用的基本理论
• 1.4.2 毛细管电色谱中溶质-固定相分配的理论基础
• 1.4.3 本研究的创新点
• 2 评价配-受体相互作用的开管毛细管电色谱方法建立
• 2.1 引言
• 2.2 结合常数计算公式的推导
• 2.3 实验部分
• 2.3.1 仪器与试药
• 2.3.2 实验方法
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 血小板浓度的确定
• 2.4.2 缓冲液对涂层稳定性的影响
• 2.4.3 涂层洗脱剂的选择
• 2.4.4 帕珠沙星与HSA 相互作用的评价
• 2.5 本章小结
• 3 阳性、阴性药物与血小板相互作用的评价
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 仪器与试药
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.3 方法的验证
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 阿司匹林与血小板相互作用的评价
• 3.3.2 帕珠沙星与血小板相互作用的评价
• 3.3.3 荧光光谱法验证阿司匹林、帕珠沙星与血小板的相互作用
• 3.3.4 亲和萃取法评价阿司匹林、帕珠沙星与血小板的相互作用
• 3.4 本章小结
• 4 核苷混合物中抗血小板成分的筛选
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 仪器与试药
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 分离条件的优化
• 4.3.2 核苷混合物中抗血小板成分的筛选
• 4.4 本章小结
• 5 中药中抗/促血小板活性成分的筛选
• 5.1 引言
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 仪器与试药
• 5.2.2 实验方法
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 丹参水提液中各成分分离条件优化
• 5.3.2 丹参中抗/促血小板活性成分的筛选
• 5.3.3 三七中核苷成分的分离条件优化
• 5.3.4 三七中抗/促血小板成分的筛选
• 5.4 本章小结
• 6 野生菌中核苷成分的分析及含量测定
• 6.1 引言
• 6.2 实验部分
• 6.2.1 仪器与试药
• 6.2.2 实验方法
• 6.3 结果与讨论
• 6.3.1 分离条件的优化
• 6.3.2 方法学考察
• 6.3.3 样品测定
• 6.4 本章小结
• 7 结论与展望
• 7.1 结论
• 7.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• A. 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录
• B. 作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目及得奖情况