DNA电化学生物传感器检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的实验研究

论文摘要

DNA电化学生物传感器是近几年迅速发展起来的一种全新的生物传感器,它是进行核酸结构分析和检测的重要手段之一,由于它具有测定快速、简便、灵敏、价廉等优点,越来越受到人们的关注。本文成功研制了一种以2-硝基吖啶酮（2-NAD）为杂交指示剂用于检测急性早幼粒细胞白血病（APL）中PML/RARα融合基因的DNA电化学生物传感器。实验结果表明,2-NAD是一种特异性较强的指示剂,能够有效地区分PML/RARα融合基因的互补与非互补序列。PML/RARα探针电极在pH 4.0的磷酸盐缓冲液（PBS）底液中,2-NAD浓度10μM,与1.31×10-7M探针互补链45℃杂交30min,检测信号效果良好。互补DNA在9.08×10-85.45×10-7 M浓度范围内,与检测信号成一次线性关系,检测限达到2.1×10-8M,可以实现对APL中PML/RARα基因定性定量的测定。此外,本文还构建了基于电化学交流阻抗技术直接监测DNA杂交的方法,对多种实验条件进行了优化。首先将5’端巯基修饰的22个碱基长度的寡聚核苷酸探针和巯基乙酸同时自组装到金电极（AuE）表面,形成杂交分子识别层。然后用交流阻抗技术进行监测,取杂交前后电极表面电子传递电阻的改变值作为杂交信号。实验中优化了杂交识别层的固定时间、探针和巯基乙酸的比例、杂交温度和时间,以及阻抗值测量液的离子强度。在各优化的条件下,探针DNA与1.0×10-8M的目标DNA 45℃杂交30min,检测到杂交前后的Ret有明显的差异,表明可以通过交流阻抗法实现对PML/RARα基因定性的测定。在对APL实际样品的初步实验研究中,用设计好的上下游引物对已提取的样品cDNA进行PCR,凝胶电泳后,将回收的胶片段进行测序分析,确定了与目标DNA完全互补的特异性探针序列,为实际样品的进一步检测研究提供了良好的基础。

论文目录

• 英文缩写词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 检测急性早幼粒细胞白血病特异基因的DNA电化学生物传感器的研制
• 材料与方法
• 结果与讨论
• 第二部分 DNA 电化学生物传感器检测急性早幼粒细胞白血病实际样品的初步实验研究
• 材料与方法
• 结果与讨论
• 参考文献
• 结论
• 致谢
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的论文