论文摘要
目的探讨葡多酚（grape procyanidins,GPC）对乳腺癌细胞的抑制作用和雌激素受体（estrogen receptor,ER）对GPC抑制乳腺癌细胞增殖的调控作用。方法实验一:将GPC和乳腺癌MCF-7细胞共同培养,设1个肿瘤对照组（GPC终浓度为0μg/mL）和5个GPC剂量组（GPC终浓度分别为10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、15μg/mL和20μg/mL）,在6h、12h、24h、48h和72h不同作用时间点,用MTT法测定各组乳腺癌细胞的增殖活性。实验二:设1个肿瘤对照组（GPC终浓度为0μg/mL）和3个GPC剂量组（GPC终浓度分别为50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL）,将GPC和MCF-7细胞共同培养24h后,用免疫细胞化学法检测各组乳腺癌细胞增殖细胞核抗原（proliferating cellnuclear antigen,PCNA）、Bcl-2、Bax和ER蛋白的表达水平。实验三:将GPC和雌激素受体阻断剂ICI182.780（简称ICI）与乳腺癌MCF-7细胞共同培养,设4个实验组:肿瘤对照组（不给予GPC和ICI）、ICI对照组(ICI10-6 mol/L)、GPC剂量组（GPC 200μg/mL）、GPC+ICI组(GPC 200μg/mL和ICI10-6mol/L),培养24h后,用MTT法测定各组乳腺癌细胞的增殖活性,用免疫细胞化学法检测各组乳腺癌细胞PCNA、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果实验一:细胞增殖活性测定结果显示,在同一作用时间点,随着GPC剂量的增加,10、50、100、150、200μg/mLGPC组的乳腺癌细胞增殖活性水平依次降低（P＜0.05）。随着作用时间的延长,100、150、200μg/mLGPC组的乳腺癌细胞增殖活性水平逐渐降低（P＜0.05）。上述实验结果表明GPC对乳腺癌细胞的增殖活性有抑制作用,并且这种抑制作用随GPC剂量的增加而增大,随作用时间的延长而明显,因此具有一定的剂量效应关系和时间效应关系。实验二:①PCNA表达结果显示,与肿瘤对照组的PCNA阳性表达率（77.10±6.23）%相比较,50、100、200μg/mLGPC组的阳性表达率（70.32±5.80）%、（47.82±7.83）%和（28.60±6.75）%均显著性降低（P＜0.05）,且3个GPC剂量组之间比较亦有统计学意义（P＜0.05）。②Bcl-2和Bax蛋白表达结果显示,肿瘤对照组的Bcl-2阳性表达率高、Bax阳性表达率低,200μg/mLGPC组的Bcl-2阳性表达率低、Bax阳性表达率高,两组之间的差别有统计学意义（P＜0.05）。③ER蛋白表达结果显示,100、200μg/mL GPC组ER蛋白阳性表达率分别为（86.22±5.86）%和（79.34±4.79）%,与肿瘤对照组ER蛋白阳性表达率（93.90±6.07）%比较均显著性降低（P＜0.05）,且两组之间的差别亦有统计学意义（P＜0.05）。实验三:①细胞增殖活性的测定结果显示,肿瘤对照组的细胞增殖活性为0.373±0.009,ICI对照组和GPC剂量组的细胞增殖活性水平分别为0.346±0.015、0.234±0.011,均较肿瘤对照组显著性降低（P＜0.05）。GPC+ICI组的细胞增殖活性水平为0.293±0.008,较GPC剂量组显著性升高0.059（P＜0.05）,较ICI对照组显著性降低0.053（P＜0.05）。②与肿瘤对照组比较,ICI对照组和GPC剂量组的PCNA阳性表达率均显著性降低（P＜0.05）。GPC+ICI组的PCNA阳性表达率较GPC剂量组显著性升高（P＜0.05）,较ICI对照组显著性降低（P＜0.05）。③GPC+ICI组的Bcl-2阳性表达率较GPC剂量组显著性升高（P＜0.05）,而Bax蛋白阳性表达率较GPC剂量组显著性降低（P＜0.05）。结论1 GPC可以有效地抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡。2 ER对GPC抑制乳腺癌细胞增殖有一定的调节作用。3 GPC可能通过降低乳腺癌细胞ER的表达水平,抑制雌激素与ER结合,进而影响雌激素促进乳腺癌细胞增殖的作用,从而抑制癌细胞的生长。4 GPC还通过除ER之外的其他途径抑制乳腺癌细胞的增殖。
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